淺顯易懂的指南

什麼是數位病理?

數位病理是將顯微鏡玻片掃描成全玻片影像,接著在電腦上(而不是在顯微鏡前)檢視、分享、標註與分析這些影像的做法。本指南說明掃描如何運作、涉及哪些檔案格式、檢視器實際上做些什麼、研究、教學與臨床用途有何不同,以及 AI 扮演什麼角色。

全玻片影像技術說明 依掃描器廠商分類的格式 研究、教學與臨床用途

數位病理的定義

在病理學大部分的歷史中,工作都是在顯微鏡前進行:組織切片經過固定、包埋、切片、染色、封片於玻片上,再以肉眼檢查。數位病理取代的是最後一步。玻片只需掃描一次,產生的數位影像會被儲存起來,之後的一切,從例行審閱到第二意見、教學、典藏與影像分析,都在螢幕上進行。

這個詞涵蓋了讓這一切成為可能的整個環境:掃描器、它們產生的全玻片影像、存放影像的儲存與影像管理系統、顯示影像的檢視器,以及處理影像的分析工具。它本身並不意味著人工智慧,雖然一旦有了影像,AI 就是成長最快的應用。

有三個相關的詞經常被混用,值得加以區分。全玻片影像技術(WSI)指的是掃描技術。虛擬顯微鏡指的是像透過顯微鏡一樣檢視掃描後的切片,教學課程常使用這個說法。遠距病理指的是遠端病理審閱,數位切片讓它變得容易許多,但它在數位切片出現之前就已存在。

玻片如何變成全玻片影像

  1. 掃描。玻片掃描器將玻片移到相機與物鏡下方,通常以 20x 或 40x 拍攝數千個互相重疊的視野,再拼接成一張影像。部分掃描器會拍攝多個焦平面(Z 堆疊),讓厚切片日後仍可重新對焦。
  2. 建立金字塔。完整解析度的影像每邊可超過 100,000 像素,大小達數 GB。因此,掃描器還會寫出逐步縮小的副本(通常每一層縮小一半),並將每一層切成圖塊。正是這個多解析度金字塔讓影像可以使用:檢視器只會請求螢幕上顯示的區域與縮放層級所需的圖塊。
  3. 記錄比例。檔案會儲存一個像素的實際大小(以微米為單位,常寫作 MPP,即每像素微米數;40x 時約 0.25 µm,20x 時約 0.5 µm)。檢視器中的每一次量測都取決於這個數值。
  4. 附加中繼資料。標籤影像、巨觀概覽影像、掃描器型號、物鏡與掃描日期都會隨檔案一起保存,此外還有實驗室印在玻片上的任何條碼。
  5. 儲存與提供。在醫院中,切片會進入影像管理系統,與實驗室資訊系統並行運作。在研究與教學中,切片通常存放在檔案共用區、雲端硬碟或筆電上,並以桌面檢視器開啟。

依掃描器廠商分類的全玻片影像格式

數位病理並沒有單一的檔案格式。每家製造商都寫出自己的容器格式,大多是圖塊式 TIFF 的變體,而檢視器的選擇往往取決於它能讀取其中哪些格式。

廠商格式說明
Aperio / Leica Biosystems.svs帶有廠商標籤的圖塊式金字塔 TIFF。研究典藏中最常見的格式。
Hamamatsu.ndpi, .vms, .vmuNDPI 是單一檔案的 TIFF 變體;VMS 與 VMU 則將像素存放在附屬檔案中。
3DHISTECH.mrxs一個小型索引檔,加上一個同名資料夾存放影像資料。
Leica (SCN400, GT450).scn以 BigTIFF 為基礎;一張切片可包含多個掃描區域。
Ventana / Roche.bif來自 iScan 系列的圖塊式 TIFF。
Akoya / PerkinElmer.qptiff多重免疫螢光,每個標記通道各一張影像。
Philips.isyntax以小波為基礎;需要 Philips 軟體或能解碼它的檢視器,例如自 1.20.0 版起的 SlideScope。
Olympus / Evident.vsi索引檔加上一個存放影像資料的資料夾。
廠商中立金字塔式 TIFF、OME-TIFF、DICOM WSI開放標準。DICOM 全玻片影像是醫院系統正在邁進的方向。

OpenSlide 與 Bio-Formats 等開源函式庫可以讀取上述大部分格式,這也是廠商中立檢視器得以存在的原因。SlideScope 可讀取 SVS、NDPI、VMS、VMU、MRXS、SCN、BIF、SVSLIDE、QPTIFF、AVS、DICOM、TIFF 與 OME-TIFF,自 1.10.0 版起支援 Olympus VSI 與 Hamamatsu NDPIS,自 1.20.0 版起支援 Philips iSyntax 與 KFBio KFB;它無法讀取 SDPC、MDSX 或 TMAP。檔案相容性參考資料列出確切的限制,數位病理掃描器比較則列出目前的掃描器型號、其容量與 DICOM 輸出。

數位病理的軟體層級

搜尋「數位病理軟體」的人,通常指的是五種截然不同的東西之一。

掃描器軟體

控制掃描器,通常會附帶一款免費檢視器,用於該廠商自家的格式,例如 SVS 用的 Aperio ImageScope 或 NDPI 用的 Hamamatsu NDP.view2。

影像管理系統

醫院等級的平台,負責儲存切片、連接實驗室資訊系統、管理病例與工作清單,並經過臨床使用驗證。以企業級價格計價,並由 IT 部署。

桌面檢視器

可在一般電腦上從檔案、資料夾或連結開啟全玻片影像的應用程式,用於審閱、量測、標註與教學。SlideScope 就屬於這一類。

分析平台

QuPath、CellProfiler、ImageJ 與 Fiji、ASAP,以及具同等功能的商業軟體,可分割組織、計數細胞並執行腳本化處理流程。檢視器通常以 GeoJSON 將區域交給它們。

AI 與計算病理

從全玻片影像偵測、分類組織或為組織分級的模型。部分模型已獲核准作為臨床決策支援;大多數則是研究工具,需要先有數位切片才能使用。

研究、教學與臨床用途是不同的問題

研究病理是目前大多數切片被掃描的地方。一個研究世代只需數位化一次,就能由多人審閱、量測、標註,並送入分析。需求是廠商中立的檔案支援、校正量測、在交接後仍能保留的標註,以及能輕鬆將確切視野傳送給合作者的方式。這裡沒有法規門檻;工具只需要準確且快速。

教學將數位切片當作虛擬顯微鏡使用。課程只需將切片盒掃描一次,每位學生就能在自己的筆電上開啟同一組切片、標記他們辨識出的結構,並互相比對筆記。這就是為什麼能在 Windows 與 macOS 上本機執行的組織學玻片檢視器對大學很重要。

在螢幕上進行臨床初次診斷受到法規管制。用於簽發病例的掃描器與檢視系統,在大多數司法管轄區都須以醫療器材取得核准或許可,實驗室會將其與玻片進行比對驗證,顯示器也有規格要求。包括 SlideScope 在內的通用檢視器並未獲准用於此目的,並會明確說明這一點。它們在臨床上只用於病例周邊的非診斷工作:教學、會議準備、典藏材料的研究,以及在機構政策允許下的品質審查。

優點與限制

數位病理讓哪些事變得更容易:不必寄送玻片就能分享切片、從不同地點同時審閱同一區域、可重複地量測、讓標註與影像保存在一起、建立永不褪色或破損的教學切片組、不需要玻片室就能典藏,以及讓影像分析或 AI 得以實現。

它的成本:一台掃描器、以 TB 計的儲存空間、掃描所需的時間、讓玻片與數位影像保持同步的工作流程,以及影像若要用於診斷所需的驗證。掃描也會失去顯微鏡提供的某些功能,例如在厚切片中重新對焦(除非掃描器拍攝了 Z 堆疊),以及偏光(除非掃描器支援)。

SlideScope 的定位

SlideScope 是一款用於研究、教育與審閱的桌面數位病理檢視器。它可以在 Windows 與 macOS 上開啟主要掃描器廠商的全玻片影像、以校正後的微米為單位量測、讓標註附著在切片上、以相同比例並排比較兩張切片、將區域匯出為 QuPath 用的 GeoJSON,並以連結分享確切的視野。它在您自己的電腦上執行,不需要影像伺服器,定價是針對實驗室而非醫院。它不是醫療器材,也不適用於初次診斷。如果您正在它與免費檢視器之間做選擇,全玻片影像檢視器比較是最誠實的起點。

數位病理詞彙表

全玻片影像(WSI)
整片玻片的十億像素級、多解析度數位掃描影像。
影像金字塔
全玻片影像一系列逐步降採樣的圖塊式副本,讓檢視器能快速顯示任何縮放層級。
MPP(每像素微米數)
完整解析度下一個像素的實際大小;也是每次量測所依賴的校正值。可以用像素尺寸計算器算出任何金字塔層級的數值。
20x 與 40x
掃描時使用的物鏡倍率,分別約為每像素 0.5 µm 與 0.25 µm。
H&E
蘇木素與伊紅,是用於組織形態學的標準染色。
IHC
免疫組織化學,一種標記特定蛋白質的染色;常與同一蠟塊的 H&E 並排審閱。
Z 堆疊
穿過厚切片拍攝的多個焦平面,讓檢視器可以重新對焦。
DICOM WSI
DICOM 標準中針對全玻片影像的增補規範,用於將病理整合進醫院影像系統。
影像管理系統
在臨床實驗室中儲存、索引並提供全玻片影像的伺服器平台。
計算病理
應用於全玻片影像的影像分析與機器學習。

關於數位病理的常見問題

數位病理與計算病理有什麼不同?

數位病理是基礎設施:掃描玻片、儲存全玻片影像,並在螢幕上檢視。計算病理則是影像數位化之後您對它們所做的事:影像分析、細胞計數、組織分類與機器學習模型。必須先有前者,才能進行後者。

數位病理和遠距病理一樣嗎?

不一樣。遠距病理指的是遠端審閱病理材料,它比全玻片影像技術更早出現,最初使用的是來自顯微鏡的即時相機畫面。數位病理讓遠距病理變得容易許多,因為掃描後的切片可以檔案或連結的形式分享,但一間實驗室可以完全數位化,卻從未進行遠端會診。

數位病理切片使用什麼檔案格式?

並沒有單一格式。每家掃描器廠商都寫出自己的格式:Aperio 與 Leica 寫出 SVS,Hamamatsu 寫出 NDPI,3DHISTECH 寫出 MRXS,Leica SCN 掃描器寫出 SCN,Ventana 寫出 BIF,Philips 寫出 iSyntax,Olympus 寫出 VSI。廠商中立的選項有金字塔式 TIFF、OME-TIFF 與 DICOM 全玻片影像。SlideScope 這類廠商中立的檢視器可以直接讀取其中大部分格式。

檢視全玻片影像需要特殊硬體嗎?

不需要。由於全玻片影像是以圖塊金字塔的形式儲存,檢視器只會載入螢幕上顯示的區域與縮放層級所需的圖塊。一般配備 8 GB RAM 的筆電,就能在幾秒內開啟數 GB 的切片。掃描確實需要玻片掃描器,臨床初次診斷也會使用經驗證的顯示器,但研究與教學審閱則不需要。

我可以在 Mac 上進行數位病理工作嗎?

可以,用於檢視與研究審閱。包括 Aperio ImageScope 在內,有幾款廠商檢視器僅支援 Windows,但 QuPath、ObjectiveView、Hamamatsu NDP.view2 與 SlideScope 都能在 macOS 上執行。SlideScope 提供原生的 Apple Silicon 與 Intel 版本,可在 Mac 上開啟 SVS、NDPI、MRXS、SCN、BIF 與 QPTIFF 切片。

開啟您的第一張全玻片影像

從內建範例庫免費開始:不需要帳戶,所有工具皆可使用。當您想開啟自己的切片時,訂閱即可解鎖所有功能(PayPal 或信用卡,訂閱時即收費)。拖入 SVS、NDPI 或 MRXS 檔案,在您自己的切片上查看金字塔、校正比例與標註工具。

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