通俗指南

什么是数字病理?

数字病理是指将玻璃显微镜切片扫描为全切片图像,然后在电脑上而不是在显微镜下查看、分享、标注和分析这些图像。本指南介绍扫描的原理、涉及哪些文件格式、查看器实际做什么、科研、教学和临床用途有何不同,以及 AI 的作用所在。

全切片成像详解 各扫描仪厂商的格式 科研、教学与临床用途

数字病理的定义

在其历史的大部分时间里,病理学都是在显微镜下进行的:组织切片经过固定、包埋、切片、染色、封片到玻片上,再由肉眼检查。数字病理取代的是最后这一步。玻璃切片只需扫描一次,生成的数字图像被存储下来,此后的一切工作,从常规审阅到第二意见、教学、存档和图像分析,都在屏幕上进行。

这个术语涵盖了实现这一切的整个环境:扫描仪、扫描仪生成的全切片图像、保存这些图像的存储和图像管理系统、显示图像的查看器,以及处理图像的分析工具。它本身并不意味着人工智能,尽管一旦有了这些图像,AI 是其增长最快的用途。

有三个相关术语常被混用,值得加以区分。全切片成像(WSI)是扫描技术。虚拟显微镜是指像通过显微镜一样查看扫描切片,这是教学项目常用的说法。远程病理是指远程病理审阅,数字切片让它变得容易得多,但它在数字切片出现之前就已存在。

玻璃切片如何变成全切片图像

  1. 扫描。切片扫描仪让玻片在相机和物镜下移动,通常以 20x 或 40x 拍摄成千上万个相互重叠的视野,并将它们拼接成一幅图像。有些扫描仪会拍摄多个焦平面(Z 堆栈),以便日后对厚切片重新对焦。
  2. 构建金字塔。全分辨率图像每边可能超过 100,000 像素,大小可达数 GB。因此,扫描仪还会写出逐级缩小的副本(通常每级缩小一半),并将每个层级切分为图块。正是这种多分辨率金字塔让图像变得可用:查看器只需请求屏幕上当前区域和缩放级别所需的图块。
  3. 记录比例。文件会以微米为单位存储一个像素的物理尺寸(常写作 MPP,即每像素微米数,40x 时约为 0.25 µm,20x 时约为 0.5 µm)。查看器中的每一次测量都依赖这个值。
  4. 附加元数据。标签图像、宏观概览图、扫描仪型号、物镜和扫描日期都保存在文件中,此外还有实验室打印在切片上的条形码。
  5. 存储与提供访问。在医院中,切片会进入图像管理系统,并与实验室信息系统相连。在科研和教学中,切片通常存放在文件共享、云盘或笔记本电脑上,并在桌面查看器中打开。

各扫描仪厂商的全切片图像格式

数字病理并没有单一的文件格式。每家制造商都写入自己的容器格式,其中大多是分块 TIFF 的变体,而选择哪款查看器往往取决于它能读取其中哪些格式。

厂商格式说明
Aperio / Leica Biosystems.svs带厂商标签的分块金字塔 TIFF。是科研档案中最常见的格式。
Hamamatsu.ndpi, .vms, .vmuNDPI 是一种单文件 TIFF 变体;VMS 和 VMU 将像素保存在配套文件中。
3DHISTECH.mrxs一个小的索引文件,加上一个同名文件夹存放图像数据。
Leica (SCN400, GT450).scn基于 BigTIFF;一张切片可包含多个扫描区域。
Ventana / Roche.bifiScan 系列生成的分块 TIFF。
Akoya / PerkinElmer.qptiff多重免疫荧光,每个标记物通道一幅图像。
Philips.isyntax基于小波;需要 Philips 软件或能解码它的查看器,例如自 1.20.0 版起的 SlideScope。
Olympus / Evident.vsi索引文件加上一个图像数据文件夹。
厂商中立金字塔 TIFF、OME-TIFF、DICOM WSI开放标准。DICOM 全切片成像是医院系统的发展方向。

OpenSlide 和 Bio-Formats 等开源库能读取其中大多数格式,这也正是厂商中立查看器得以存在的原因。SlideScope 可读取 SVS、NDPI、VMS、VMU、MRXS、SCN、BIF、SVSLIDE、QPTIFF、AVS、DICOM、TIFF 和 OME-TIFF,自 1.10.0 版起还支持 Olympus VSI 和 Hamamatsu NDPIS,自 1.20.0 版起支持 Philips iSyntax 和 KFBio KFB;它不能读取 SDPC、MDSX 或 TMAP。文件兼容性参考列出了确切的限制,数字病理扫描仪对比则列出了当前的扫描仪型号、容量及 DICOM 输出能力。

数字病理的软件层次

人们搜索“数字病理软件”时,通常指的是五种截然不同的东西之一。

扫描仪软件

控制扫描仪,通常附带一款用于该厂商自有格式的免费查看器,例如用于 SVS 的 Aperio ImageScope 或用于 NDPI 的 Hamamatsu NDP.view2。

图像管理系统

医院级平台,用于存储切片、连接实验室信息系统、管理病例和工作列表,并经过临床使用验证。按企业级定价,由 IT 部门部署。

桌面查看器

可在普通电脑上从文件、文件夹或链接打开全切片图像的应用程序,用于审阅、测量、标注和教学。SlideScope 就属于这一类。

分析平台

QuPath、CellProfiler、ImageJ 和 Fiji、ASAP 以及同类商业软件,可进行组织分割、细胞计数和脚本化处理流程。查看器通常以 GeoJSON 格式将区域交给它们。

AI 与计算病理

基于全切片图像对组织进行检测、分类或分级的模型。其中一些已获批作为临床决策支持工具;大多数是研究工具,前提是必须先有数字切片。

科研、教学和临床用途是不同的问题

科研病理是当今大多数切片被扫描的领域。一个队列只需数字化一次,然后由多人审阅、测量、标注,并送入分析流程。其要求是厂商中立的文件支持、校准测量、交接后依然保留的标注,以及能轻松把确切视野发给合作者的方式。这里没有监管门槛;工具只需准确且快速。

教学把数字切片当作虚拟显微镜使用。一门课程只需把切片盒扫描一次,每位学生就能在自己的笔记本电脑上打开同一套切片,标记自己识别出的结构,并相互对照。这就是为什么能在 Windows 和 macOS 上本地运行的组织学切片查看器对大学很重要。

在屏幕上进行临床初诊是受监管的。在大多数司法管辖区,用于签发病例的扫描仪和查看系统都需作为医疗器械获批或认证,实验室需对照玻璃切片进行验证,显示器也有规定要求。包括 SlideScope 在内的通用查看器未获此类认证,并会明确说明这一点。它们在临床中只用于病例周边的非诊断性工作:教学、病例讨论会准备、对存档材料的研究,以及在机构政策允许范围内的质量审查。

优势与局限

数字病理让哪些事情更容易:无需寄送玻片即可分享切片,在不同地点同时审阅同一区域,可重复地进行测量,让标注始终与图像在一起,建立永不褪色或破损的教学切片集,无需切片库房即可存档,以及能够进行图像分析或 AI 分析。

它的代价:一台扫描仪、以 TB 计的存储空间、扫描所需的时间、保持玻片与数字图像同步的工作流程,以及在图像用于诊断时所需的验证。扫描也会失去显微镜提供的某些能力,例如在厚切片中重新对焦(除非扫描仪拍摄了 Z 堆栈),以及偏振光(除非扫描仪支持)。

SlideScope 的定位

SlideScope 是一款用于科研、教育和审阅的桌面数字病理查看器。它可以在 Windows 和 macOS 上打开主要扫描仪厂商的全切片图像,以校准后的微米为单位测量,让标注始终附着在切片上,以相同比例并排对比两张切片,将区域导出为 GeoJSON 供 QuPath 使用,并以链接形式分享确切的视野。它在您自己的电脑上运行,无需图像服务器,定价面向实验室而非医院。它不是医疗器械,不用于初诊。如果您正在它和免费查看器之间做选择,全切片图像查看器对比是一个客观的起点。

数字病理术语表

全切片图像(WSI)
对整张玻璃切片进行的十亿像素级、多分辨率数字扫描。
图像金字塔
全切片图像的一组逐级降采样、分块的副本,使查看器能快速显示任意缩放级别。
MPP(每像素微米数)
全分辨率下一个像素的物理尺寸;是每一次测量所依赖的校准值。可使用像素尺寸计算器计算任意金字塔层级的值。
20x 和 40x
扫描时使用的物镜放大倍数,分别约为每像素 0.5 µm 和 0.25 µm。
H&E
苏木精-伊红染色,是观察组织形态的标准染色。
IHC
免疫组织化学,一种标记特定蛋白质的染色;常与同一蜡块的 H&E 切片并排审阅。
Z 堆栈
在厚切片中拍摄的多个焦平面,使查看器可以重新对焦。
DICOM WSI
DICOM 标准中针对全切片图像的补充部分,用于将病理整合到医院影像系统中。
图像管理系统
在临床实验室中存储、索引和提供全切片图像的服务器平台。
计算病理
应用于全切片图像的图像分析和机器学习。

关于数字病理的常见问题

数字病理和计算病理有什么区别?

数字病理是基础设施:扫描切片、存储全切片图像,并在屏幕上查看。计算病理是在图像数字化之后对其进行的处理:图像分析、细胞计数、组织分类和机器学习模型。先有前者,才能做后者。

数字病理和远程病理是一回事吗?

不是。远程病理是指远程审阅病理材料,它早于全切片成像出现,最初使用的是显微镜摄像头的实时画面。数字病理让远程病理变得容易得多,因为扫描切片可以作为文件或链接分享;但一个实验室完全可以实现全面数字化,却从不进行远程会诊。

数字病理切片使用什么文件格式?

没有单一格式。每家扫描仪厂商都写入自己的格式:Aperio 和 Leica 写入 SVS,Hamamatsu 写入 NDPI,3DHISTECH 写入 MRXS,Leica SCN 扫描仪写入 SCN,Ventana 写入 BIF,Philips 写入 iSyntax,Olympus 写入 VSI。厂商中立的选择有金字塔 TIFF、OME-TIFF 和 DICOM 全切片成像。SlideScope 这样的厂商中立查看器可以直接读取其中大多数格式。

查看全切片图像需要特殊硬件吗?

不需要。由于全切片图像以图块金字塔的形式存储,查看器只需加载屏幕上当前区域和缩放级别所需的图块。一台配备 8 GB 内存的普通笔记本电脑就能在几秒内打开数 GB 的切片。扫描确实需要切片扫描仪,临床初诊也要使用经过验证的显示器,但科研和教学审阅则不需要。

可以在 Mac 上进行数字病理工作吗?

可以,用于查看和科研审阅。包括 Aperio ImageScope 在内的几款厂商查看器仅支持 Windows,但 QuPath、ObjectiveView、Hamamatsu NDP.view2 和 SlideScope 都可在 macOS 上运行。SlideScope 提供原生 Apple Silicon 和 Intel 版本,可在 Mac 上打开 SVS、NDPI、MRXS、SCN、BIF 和 QPTIFF 切片。

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