Základy mikroskopie
Kalkulačka zorného pole mikroskopu
Zjistěte, jak široký je kruh, který vidíte v okuláru, přeneste změřené zorné pole z malého na velké zvětšení, určete plochu, kterou zachytí kamera, a odhadněte velikost buňky podle toho, kolik se jich vejde přes zorné pole.
Vzorec pro zorné pole
Průměr FOV = číslo pole ÷ (zvětšení objektivu × zvětšení pomocné čočky)
Číslo pole (FN) je průměr clony zorného pole okuláru v mm a často je vyryto na okuláru za zvětšením (například „10×/22“). MicroscopyU uvádí jako celkový rozsah 6 až 28 mm a jako typickou hodnotu pro okulár 10× 16 až 18 mm; výzkumné mikroskopy často používají 22 mm nebo více. Samotné zvětšení okuláru ve vzorci není, protože číslo pole už popisuje, co okulár ukazuje.
Příklad výpočtu: FN 22 s objektivem 40×: 22 ÷ 40 = 0,55 mm, tedy 550 µm. S objektivem 10×: 2,2 mm.
Zorné pole při velkém zvětšení z hodnoty při malém zvětšení
Ve výukové laboratoři obvykle změříte zorné pole jednou při malém zvětšení, průhledným pravítkem nebo objektivovým mikrometrem, a zbytek dopočítáte. Průměr zorného pole je nepřímo úměrný celkovému zvětšení:
FOV(velké) = FOV(malé) × zvětšení(malé) ÷ zvětšení(velké)
Příklad výpočtu: 4,5 mm (4500 µm) při celkovém zvětšení 40×. Při celkovém zvětšení 400×: 4500 × 40 ÷ 400 = 450 µm. Pokud se přes toto pole vejde asi 10 buněk, měří každá buňka zhruba 45 µm.
Zorné pole kamery mikroskopu
Kamera nevidí kruh okuláru, ale obdélník. Jeho velikost ve vzorku je velikost čipu vydělená zvětšením mezi vzorkem a čipem (objektiv × adaptér kamery):
šířka pole = počet pixelů na šířku × velikost pixelu kamery ÷ (objektiv × adaptér)
Příklad výpočtu: kamera sCMOS 2048 × 2048 s pixely 6,5 µm na objektivu 20× a s adaptérem 1×: 2048 × 6,5 ÷ 20 = 666 µm na každé straně, při 0,325 µm na pixel. Soubor z mikroskopu tuto velikost pixelu obvykle zaznamenává v metadatech, a díky tomu prohlížeče kreslí správné měřítko.
Otázky
Jak se počítá zorné pole mikroskopu?
Vydělte číslo pole okuláru (mm) zvětšením objektivu. Číslo pole 20 s objektivem 10× dává zorné pole 2 mm; s objektivem 40× 0,5 mm.
Kde najdu číslo pole?
Je vyryto na okuláru za zvětšením, například „10×/20“ nebo „WF10×/22“. Pokud tam není, změřte zorné pole při malém zvětšení objektivovým mikrometrem nebo průhledným pravítkem.
Jak zjistit zorné pole při velkém zvětšení?
Vynásobte průměr zorného pole při malém zvětšení malým zvětšením a vydělte velkým zvětšením. Z 4,5 mm při 40× se stane 4,5 × 40 ÷ 400 = 0,45 mm při 400×.
Jak odhadnout velikost buňky ze zorného pole?
Spočítejte, kolik buněk by se vešlo přes průměr zorného pole, a vydělte: pole 450 µm, do kterého se vejde asi 10 buněk za sebou, znamená, že každá buňka měří asi 45 µm.
Je tato kalkulačka zdarma?
Ano. Běží ve vašem prohlížeči a nikam nic neposílá. SlideScope, desktopová aplikace pro mikroskopii od stejného týmu, je placená aplikace s bezplatnou knihovnou ukázek (všechny nástroje) a předplatným pro vlastní snímky.
Zdroje
Výsledky jsou teoretické nebo aritmetické; než se na ně budete spoléhat při klinické nebo regulované práci, ověřte je podle dokumentace svého přístroje.
Měřte na svých skutečných snímcích
SlideScope otevře 34 formátů mikroskopů a skenerů preparátů, mimo jiné CZI, ND2, SVS a LIF, s jejich vlastní kalibrací, takže délky, plochy, počty buněk i měřítka vycházejí v µm bez jakéhokoli nastavování. Vyzkoušejte všechny nástroje zdarma na vestavěných ukázkách; pro otevírání vlastních snímků potřebujete předplatné. Už máte jasno? Předplaťte si ho.