Noções básicas de microscopia
Calculadora de campo de visão do microscópio
Calcule a largura do círculo que você vê na ocular, transfira um campo medido do aumento menor para o maior, descubra a área que uma câmera captura e estime o tamanho de uma célula a partir de quantas cabem no campo.
A fórmula do campo de visão
Diâmetro do FOV = número de campo ÷ (ampliação da objetiva × ampliação da lente auxiliar)
O número de campo (FN) é o diâmetro, em mm, do diafragma de campo da ocular, e muitas vezes vem gravado na ocular depois da ampliação (por exemplo, "10×/22"). O MicroscopyU indica de 6 a 28 mm como a faixa geral e de 16 a 18 mm como o típico para uma ocular de 10×; microscópios de pesquisa costumam usar 22 mm ou mais. A ampliação da ocular em si não aparece na fórmula, porque o número de campo já descreve o que a ocular mostra.
Exemplo resolvido: FN 22 com uma objetiva de 40×: 22 ÷ 40 = 0,55 mm, ou 550 µm. Com uma objetiva de 10×: 2,2 mm.
Campo de visão no aumento maior a partir do aumento menor
Em uma aula prática, normalmente você mede o campo uma vez no aumento menor, com uma régua transparente ou um micrômetro de platina, e calcula o resto. O diâmetro do campo varia na proporção inversa da ampliação total:
FOV(maior) = FOV(menor) × ampliação(menor) ÷ ampliação(maior)
Exemplo resolvido: 4,5 mm (4500 µm) com 40× de ampliação total. Com 400× de ampliação total: 4500 × 40 ÷ 400 = 450 µm. Se cerca de 10 células cabem nesse campo, cada célula tem aproximadamente 45 µm.
Campo de visão de uma câmera de microscópio
Uma câmera vê um retângulo, não o círculo da ocular. O tamanho dele na amostra é o tamanho do sensor dividido pela ampliação entre a amostra e o sensor (objetiva × adaptador da câmera):
largura do campo = pixels na largura × tamanho de pixel da câmera ÷ (objetiva × adaptador)
Exemplo resolvido: uma câmera sCMOS de 2048 × 2048 com pixels de 6,5 µm em uma objetiva de 20× e um adaptador de 1×: 2048 × 6,5 ÷ 20 = 666 µm de cada lado, com 0,325 µm por pixel. Um arquivo do microscópio normalmente registra esse tamanho de pixel nos metadados, e é assim que os visualizadores desenham uma barra de escala correta.
Perguntas
Como se calcula o campo de visão de um microscópio?
Divida o número de campo da ocular (mm) pela ampliação da objetiva. Um número de campo de 20 com uma objetiva de 10× dá um campo de visão de 2 mm; com uma objetiva de 40×, 0,5 mm.
Onde encontro o número de campo?
Ele vem gravado na ocular depois da ampliação, por exemplo "10×/20" ou "WF10×/22". Se não estiver lá, meça o campo no aumento menor com um micrômetro de platina ou uma régua transparente.
Como encontro o campo de visão no aumento maior?
Multiplique o diâmetro do campo no aumento menor pela ampliação menor e divida pela ampliação maior. 4,5 mm a 40× se tornam 4,5 × 40 ÷ 400 = 0,45 mm a 400×.
Como estimo o tamanho de uma célula a partir do campo de visão?
Conte quantas células caberiam ao longo do diâmetro do campo e divida: um campo de 450 µm que comporta cerca de 10 células enfileiradas significa que cada célula tem cerca de 45 µm.
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Fontes
Os resultados são teóricos ou aritméticos; confira-os com a documentação do seu instrumento antes de usá-los em trabalhos clínicos ou regulamentados.
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