Noções básicas de microscopia
Calculadora do campo de visão do microscópio
Calcule a largura do círculo que vê na ocular, transporte um campo medido da baixa para a alta ampliação, determine a área que uma câmara capta e estime o tamanho de uma célula a partir de quantas cabem ao longo do campo.
A fórmula do campo de visão
Diâmetro do FOV = número de campo ÷ (ampliação da objetiva × ampliação da lente auxiliar)
O número de campo (FN) é o diâmetro, em mm, do diafragma de campo da ocular e está muitas vezes gravado na ocular a seguir à ampliação (por exemplo "10×/22"). A MicroscopyU indica 6 a 28 mm como intervalo geral e 16 a 18 mm como típico para uma ocular de 10×; os microscópios de investigação usam muitas vezes 22 mm ou mais. A ampliação da ocular em si não aparece na fórmula, porque o número de campo já descreve o que a ocular mostra.
Exemplo prático: FN 22 com uma objetiva de 40×: 22 ÷ 40 = 0,55 mm, ou seja, 550 µm. Com uma objetiva de 10×: 2,2 mm.
Campo de visão em alta ampliação a partir da baixa ampliação
Numa aula prática de laboratório, normalmente mede-se o campo uma vez em baixa ampliação, com uma régua transparente ou um micrómetro de platina, e calcula-se o resto. O diâmetro do campo é inversamente proporcional à ampliação total:
FOV(alta) = FOV(baixa) × ampliação(baixa) ÷ ampliação(alta)
Exemplo prático: 4,5 mm (4500 µm) com 40× de ampliação total. Com 400× de ampliação total: 4500 × 40 ÷ 400 = 450 µm. Se cerca de 10 células couberem ao longo desse campo, cada célula mede aproximadamente 45 µm.
Campo de visão de uma câmara de microscópio
Uma câmara vê um retângulo, não o círculo da ocular. O seu tamanho na amostra é o tamanho do sensor dividido pela ampliação entre a amostra e o sensor (objetiva × adaptador da câmara):
largura do campo = píxeis na largura × tamanho de píxel da câmara ÷ (objetiva × adaptador)
Exemplo prático: uma câmara sCMOS de 2048 × 2048 com píxeis de 6,5 µm numa objetiva de 20× e um adaptador de 1×: 2048 × 6,5 ÷ 20 = 666 µm de cada lado, a 0,325 µm por píxel. Um ficheiro do microscópio regista normalmente este tamanho de píxel nos seus metadados, e é assim que os visualizadores desenham uma barra de escala correta.
Perguntas
Como se calcula o campo de visão de um microscópio?
Divida o número de campo da ocular (mm) pela ampliação da objetiva. Um número de campo de 20 com uma objetiva de 10× dá um campo de visão de 2 mm; com uma objetiva de 40×, 0,5 mm.
Onde encontro o número de campo?
Está gravado na ocular a seguir à ampliação, por exemplo "10×/20" ou "WF10×/22". Se não estiver, meça o campo em baixa ampliação com um micrómetro de platina ou uma régua transparente.
Como se determina o campo de visão em alta ampliação?
Multiplique o diâmetro do campo em baixa ampliação pela ampliação baixa e divida pela ampliação alta. 4,5 mm a 40× passa a 4,5 × 40 ÷ 400 = 0,45 mm a 400×.
Como estimo o tamanho de uma célula a partir do campo de visão?
Conte quantas células caberiam ao longo do diâmetro do campo e divida: um campo de 450 µm que contém cerca de 10 células lado a lado significa que cada célula mede cerca de 45 µm.
Esta calculadora é gratuita?
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Fontes
Os resultados são teóricos ou aritméticos; confronte-os com a documentação do seu instrumento antes de confiar neles para trabalho clínico ou regulamentado.
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