ทำไมการเปรียบเทียบทรีตเมนต์ด้วยมือจึงผิดพลาดได้ง่าย
การตั้งค่าที่ต่างกันในแต่ละภาพ
การนับแต่ละภาพแยกกันเปิดโอกาสให้ค่าขีดแบ่งหรือบริเวณเปลี่ยนไปเล็กน้อยจากภาพหนึ่งไปอีกภาพ และความแตกต่างระหว่างทรีตเมนต์อาจมาจากการตั้งค่าแทนที่จะมาจากชีววิทยา
n ที่สูงเกินจริง
การถือว่าทุกภาพหรือทุกเซลล์เป็นการสังเกตที่เป็นอิสระต่อกัน ทำให้ n มากกว่าจำนวนสัตว์ทดลองหรือชุดเพาะเลี้ยงไปมาก และค่า p ดูน่าเชื่อถือเกินกว่าที่การทดลองรองรับ
ค่าผิดปกติที่ไม่มีใครตรวจดู
ขอบเขตภาพที่หลุดโฟกัสเพียงภาพเดียวหรือรอยพับของเนื้อเยื่อ อาจทำให้ค่าของทั้งตัวอย่างเปลี่ยนไป และในสเปรดชีตที่มีแต่ตัวเลข ไม่มีอะไรชี้กลับไปยังภาพที่เป็นต้นเหตุ