正しいスケールバーを追加する方法
- ピクセルサイズを取得します。最善なのは元ファイルのメタデータから取得することです(Fiji:Image › Properties。ほとんどの顕微鏡形式に記録されています)。それ以外の場合は、ピクセルサイズ計算ツールでカメラと対物レンズから計算するか、対物ミクロメーターで計測します。
- フル解像度の画像を使います。画像をリサイズしたり、トリミングして拡大縮小したりした場合は、ピクセルサイズも同じ倍率で変わっています。2 分の 1 に縮小すると、1 ピクセルあたりの µm は 2 倍になります。
- きりのよい長さを選びます(1、2、5、10、20、50、100 µm…)。画像幅の 10〜20 % 程度にすると、標本を覆わずにひと目で読み取れます。
- 目立たない隅に配置します。背景とコントラストのある色を使い、長さをバーの上か凡例に記載します。
上のツールはこれらのルールに従っています。長さを空欄にすると、幅の約 5 分の 1 に近いきりのよい値が選ばれます。ほとんどのブラウザーは TIFF ファイルを開けないため、先に PNG で保存してください(Fiji:File › Save As › PNG)。
スケールバーの計算式
バーの長さ(px)= バーの長さ(µm)÷ ピクセルサイズ(µm/px) · 実際の大きさ = 物体の長さ ÷ バーの長さ × バーの値
計算例(論文用の図):1 ピクセルあたり 0.25 µm で 50 µm のバーなら、50 ÷ 0.25 = 200 ピクセルです。
計算例(生物の問題):印刷された顕微鏡写真で、細胞を定規で測ると 36 mm、10 µm のスケールバーは 20 mm でした。実際の大きさ = 36 ÷ 20 × 10 = 18 µm。どちらの長さも同じ定規で測っているので単位は打ち消し合い、答えの単位はバーの値だけで決まります。この印刷物の倍率は 20 mm ÷ 10 µm = 20,000 µm ÷ 10 µm = ×2000 です。
Fiji と SlideScope でのスケールバー
Fiji / ImageJ:スケールを設定または確認し(Analyze › Set Scale)、Analyze › Tools › Scale Bar… で幅、位置、色を選び、ピクセルを変更しないよう Overlay にチェックを入れます。
SlideScope:ビューアは CZI、ND2、SVS、LIF、OME-TIFF などの対応形式からピクセルサイズを読み取り、ズームに追従するスケールバーを表示します。File › Make Figure… を使うと、文字ラベルとスケールバー付きのパネルをレイアウトし、ファイルのメタデータから Methods の段落を書き出せます。図の保存にはサブスクリプションが必要です。ファイルにピクセルサイズがない場合は、View › Set Pixel Size… で追加できます。
質問
顕微鏡画像にスケールバーを追加するには?
画像のピクセルサイズ(µm/ピクセル)が必要です。表示したいバーの長さをピクセルサイズで割ってピクセル単位の長さを求め、描画します。または、このページのツール、Fiji の Analyze › Tools › Scale Bar、顕微鏡のソフトウェアを使います。
スケールバーから標本の実際の大きさを計算するには?
物体とスケールバーを定規で測り、物体の長さをバーの長さで割って、バーの値を掛けます:36 mm ÷ 20 mm × 10 µm = 18 µm。
画像はアップロードされますか?
いいえ。画像はブラウザーで読み込まれ、このページ内のキャンバスに描画されます。サーバーには何も送信されません。タブを閉じると破棄されます。
スケールバーはどのくらいの長さにすべきですか?
画像幅の約 10〜20 % に相当するきりのよい数値(1、2、5 × 10 のべき乗)です。短すぎるバーは読みにくく、長すぎるバーは標本を覆ってしまいます。
TIFF にスケールバーを追加できますか?
ほとんどのブラウザーは TIFF ファイルを表示できないため、先に画像を PNG で保存してください。Fiji や SlideScope などのデスクトップツールなら TIFF を直接開き、校正情報も読み取れます。
このツールは無料ですか?
はい。ブラウザー内で動作し、どこにもデータを送信しません。同じチームが開発したデスクトップ顕微鏡アプリ SlideScope は、無料のサンプルライブラリ(全ツール利用可)が付属する有料アプリで、ご自身の画像にはサブスクリプションが必要です。
出典
結果は理論値または計算値です。臨床業務や規制対象の業務で用いる前に、お使いの機器の資料と照らし合わせて確認してください。
実際の画像で計測する
SlideScope は CZI、ND2、SVS、LIF を含む 34 種類の顕微鏡・スライドスキャナー形式を、それぞれの校正情報とともに開くため、長さ、面積、細胞数、スケールバーを設定なしで µm 単位で得られます。内蔵サンプルですべてのツールを無料でお試しいただけます。ご自身の画像を開くにはサブスクリプションが必要です。もうお決まりですか?今すぐ登録。