تقييم IHC
حاسبة مؤشر Ki-67
أدخل الأنوية الإيجابية لـ Ki-67 والأنوية التي عددتها لتحصل على مؤشر الوسم كنسبة مئوية، مع فاصل 95 % يبيّن إلى أي حد قد يخطئ العدّ وحده. وتخبرك حاسبة ثانية بعدد الأنوية التي ينبغي عدّها للدقة التي تحتاجها. المعادلة وطرق العدّ ومصادرها في الأسفل.
كيف يُحسب مؤشر Ki-67
Ki-67 بروتين نووي موجود في الخلايا التي تمر بدورة الخلية وغائب عن الخلايا الساكنة، لذا فإن نسبة أنوية الخلايا الورمية المصبوغة به مقياس للتكاثر. ومؤشر Ki-67 (ويُسمى أيضًا مؤشر الوسم أو مؤشر التكاثر) هو هذه النسبة معبّرًا عنها بنسبة مئوية.
مؤشر Ki-67 (%) = أنوية الخلايا الورمية الإيجابية ÷ (أنوية الخلايا الورمية الإيجابية + السلبية) × 100
مثال محلول: 180 نواة ورمية بنية (إيجابية) و820 زرقاء (سلبية) تساوي 1,000 نواة إجمالًا، لذا يكون المؤشر 180 ÷ 1,000 × 100 = 18 %. عدّ 1,000 نواة لا يحدد هذه القيمة إلا ضمن نحو 15.7 % إلى 20.5 %؛ أما القيمة نفسها 18 % المحسوبة من 200 نواة فقد تقع في أي مكان بين نحو 13 % و24 %.
يُعدّ أي صبغ نووي فوق الخلفية إيجابيًا عادةً، أيًّا كانت قوته؛ ولا تُعدّ إلا أنوية الخلايا الورمية، لا الخلايا اللمفاوية ولا السدى ولا البطانة.
أين تعدّ: المقطع كله أم البؤرة الساخنة
نادرًا ما يكون صبغ Ki-67 متجانسًا، لذا فإن موضع العدّ يغيّر النتيجة أكثر مما يغيّرها الحساب. استخدم الطريقة التي تحددها إرشادات نوع الورم لديك، واذكر الطريقة التي استخدمتها.
- الطريقة الشاملة (سرطان الثدي): توصي International Ki67 in Breast Cancer Working Group بطريقة بصرية معيارية تقيّم حقولًا تمثّل مدى الصبغ عبر المقطع وتسجّل درجة شاملة موزونة، بدلًا من البؤرة الساخنة وحدها، التي كانت أكثر تفاوتًا بين المراقبين.
- البؤرة الساخنة (الأورام العصبية الصماوية): يقرأ التدريج المؤشر في المنطقة ذات أعلى وسم، مع عدّ 500 خلية ورمية على الأقل فيها، وكثير من المختبرات تعدّ من صورة مطبوعة أو ملتقطة بدلًا من التقدير بالعين.
- التقدير بالعين أضعف الطرق: التقديرات دون عدّ هي الأكثر تفاوتًا بين المراقبين. العدّ على صورة ملتقطة، أو بتحليل صور تحققت منه، أكثر قابلية للتكرار.
ووفق مجموعة العمل نفسها، كانت القيم 5 % أو أقل و30 % أو أكثر هي النطاقات التي عُدّ فيها Ki-67 موثوقًا بما يكفي للاستناد إليه في تقدير المآل في سرطان الثدي المبكر؛ أما القيم بينهما فكان الاتفاق عليها بين المختبرات أقل. القيم الفاصلة السريرية تحددها إرشادات نوع الورم، لا هذه الصفحة.
كم نواة ينبغي عدّها
العدّ عيّنة، ويتقلص عدم اليقين فيه مع الجذر التربيعي للعدد المعدود. الفاصل الذي تعرضه الحاسبة هو فاصل Wilson لنسبة. وللتخطيط يكفي التقريب الطبيعي المعتاد: لمؤشر متوقع p وهامش مطلوب ± m (كلاهما ككسر)، يكون عدد الأنوية اللازم لفاصل 95 % نحو:
n = 1.96² × p × (1 − p) ÷ m²
| المؤشر المتوقع | ± 5 نقاط | ± 3 نقاط | ± 2 نقطة |
|---|---|---|---|
| 5 % | 73 | 203 | 457 |
| 10 % | 139 | 385 | 865 |
| 20 % | 246 | 683 | 1,537 |
| 30 % | 323 | 897 | 2,017 |
| 50 % | 385 | 1,068 | 2,401 |
هذا خطأ العدّ فقط. ولا يقول شيئًا عن الحقول التي اخترتها ولا عن موضع الحدّ الذي وضعته بين الإيجابي والسلبي، ولهذا فإن ثبات الطريقة أهم من عدّ كبير جدًا.
الحصول على الدرجة نفسها من البرامج
تصل برامج تحليل الصور إلى هذه الدرجات بالحساب نفسه، مع استبدال العين بالقياس. فهي تكشف كل نواة في المنطقة، وتفصل صبغة DAB البنية عن الهيماتوكسيلين الأزرق بفصل الألوان (colour deconvolution)، وتقيس متوسط الكثافة الضوئية لـ DAB في كل نواة، ثم تصنّفها وفق عتبات تحددها أنت: عتبة واحدة للإيجابي أو السلبي، وثلاث عتبات للدرجات 1+ و2+ و3+.
- QuPath (مجاني ومفتوح المصدر): تعطي Positive cell detection بعتبة واحدة نسبة الخلايا الإيجابية؛ وبثلاث عتبات تعطي H-score أيضًا.
- Fiji / ImageJ (مجاني): Colour Deconvolution بمتجهات H DAB، ثم العتبة والعدّ؛ أما حساب الدرجة فعليك أنت.
- SlideScope: يعدّ الأنوية في المنطقة التي تختارها، ويصنّف كلًّا منها، ويعطي النسبة الإيجابية وH-score ودرجة Allred معًا، بالتعريفات نفسها المستخدمة في QuPath. ويمكنك أيضًا السؤال بلغة بسيطة عبر Ask Your Slide؛ فكل رقم يأتي من الأداة المحلية، مع حدود يمكنك التحقق منها. للاستخدام البحثي فقط.
أيًّا كانت الأداة، فالعتبات خيارات: اكتبها في قسم الطرق، وطابق الحدود مع الصورة، وثبّتها في كل الشرائح التي تقارن بينها. خطوة بخطوة: كيفية القياس الكمي لصبغة IHC.
أسئلة
كيف تحسب مؤشر Ki-67؟
اقسم عدد أنوية الخلايا الورمية الإيجابية لـ Ki-67 على جميع أنوية الخلايا الورمية المعدودة (الإيجابية زائد السلبية) واضرب الناتج في 100. مع 180 نواة إيجابية من أصل 1,000 نواة يكون المؤشر 18 %.
كم خلية ينبغي عدّها لـ Ki-67؟
يتوقف ذلك على إرشادات نوع الورم والدقة التي تحتاجها. يعدّ تدريج الأورام العصبية الصماوية 500 خلية ورمية على الأقل في البؤرة الساخنة. وإحصائيًا، تعطي نحو 700 نواة ± 3 نقاط مئوية عند مؤشر قريب من 20 %، ونحو 250 نواة ± 5.
هل يُعدّ Ki-67 في البؤر الساخنة أم عبر المقطع كله؟
اتبع إرشادات نوع الورم. توصي International Ki67 in Breast Cancer Working Group بدرجة شاملة موزونة عبر المقطع؛ ويعتمد تدريج الأورام العصبية الصماوية على البؤرة الساخنة. واذكر دائمًا الطريقة التي استخدمتها.
ما مؤشر Ki-67 المرتفع؟
لا توجد قيمة فاصلة واحدة: الأمر يتوقف على نوع الورم والإرشادات. في سرطان الثدي المبكر، رأت International Ki67 Working Group أن 5 % أو أقل و30 % أو أكثر موثوقة بما يكفي للاستناد إليها في تقدير المآل. أما نتيجة مريض بعينه، فاسأل اختصاصي علم الأمراض الذي أعدّ التقرير أو الطبيب المعالج.
هل تستطيع البرامج عدّ Ki-67؟
نعم. يكشف تحليل الصور كل نواة في المنطقة ويصنّفها إيجابية أو سلبية بحسب صبغة DAB؛ ويعطي كل من QuPath وSlideScope النسبة الإيجابية بهذه الطريقة. وتصف مجموعة العمل التقييم الآلي بأنه لا يزال قيد البحث للاستخدام السريري، لذا تحقّق من الحدود والعتبات وتعامل مع النتيجة على أنها مخرجات بحثية.
هل هذه الحاسبة مجانية؟
نعم. تعمل في متصفحك ولا ترسل أي شيء إلى أي مكان. أما SlideScope، تطبيق المجهر وعلم الأمراض المكتبي من الفريق نفسه، فهو تطبيق مدفوع مع مكتبة عينات مجانية (بكل الأدوات) واشتراك لصورك الخاصة.
المصادر
- Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
- Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (العدّ في البؤرة الساخنة لـ 500 خلية على الأقل)
- توثيق QuPath: مؤشر وسم Ki67 عبر Positive cell detection
- NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods، 7.2.4.1: فواصل الثقة لنسبة (طريقة Wilson)
تجري هذه الحاسبات عمليات حسابية لأغراض البحث والتعليم. وهي ليست أداة تشخيصية: التقييم لرعاية المرضى يتبع الاختبار المُصادق عليه، والإرشادات الحالية لذلك الواسم، وحكم اختصاصي علم الأمراض.
قيّم الشريحة بدلًا من العدّ اليدوي
يعدّ SlideScope الأنوية في منطقة من شريحتك، ويصنّف كلًّا منها بحسب صبغة DAB، ويعطي النسبة الإيجابية وH-score ودرجة Allred مع الحدود للتحقق منها، على حاسوبك. أو اكتب السؤال: يشغّل Ask Your Slide الأدوات نفسها ويعرض الأدلة. للاستخدام البحثي فقط. جرّب كل الأدوات مجانًا على العينات المدمجة؛ أما فتح صورك الخاصة فيتطلب اشتراكًا. هل حسمت قرارك؟ اشترك الآن.