Calculateur de l’index Ki-67

Calculateur de l’index Ki-67

Comment se calcule l’index Ki-67

Ki-67 est une protéine nucléaire présente dans les cellules engagées dans le cycle cellulaire et absente des cellules au repos : la proportion de noyaux tumoraux marqués est donc une mesure de la prolifération. L’index Ki-67 (aussi appelé index de marquage ou index de prolifération) exprime cette proportion en pourcentage.

Index Ki-67 (%) = noyaux tumoraux positifs ÷ (noyaux tumoraux positifs + négatifs) × 100

Exemple détaillé : 180 noyaux tumoraux bruns (positifs) et 820 bleus (négatifs) font 1 000 noyaux au total : l’index est donc de 180 ÷ 1 000 × 100 = 18 %. Un comptage de 1 000 noyaux ne permet de le situer qu’entre environ 15,7 % et 20,5 % ; les mêmes 18 % obtenus sur 200 noyaux pourraient se situer n’importe où entre environ 13 % et 24 %.

Tout marquage nucléaire supérieur au bruit de fond compte habituellement comme positif, quelle que soit son intensité ; seuls les noyaux tumoraux sont comptés, pas les lymphocytes, le stroma ni l’endothélium.

Où compter : coupe entière ou hot-spot

Le marquage Ki-67 est rarement homogène : l’endroit où vous comptez modifie davantage le résultat que l’arithmétique. Utilisez la méthode que désigne la recommandation pour votre type de tumeur, et précisez laquelle vous avez utilisée.

• Global (cancer du sein) : l’International Ki67 in Breast Cancer Working Group recommande une méthode visuelle standardisée qui score des champs représentatifs de l’éventail du marquage sur la coupe et consigne un score global pondéré, plutôt que le seul hot-spot, plus variable d’un observateur à l’autre.
• Hot-spot (tumeurs neuroendocrines) : le grade est établi d’après l’index mesuré dans la zone où le marquage est le plus élevé, avec au moins 500 cellules tumorales comptées à cet endroit, et de nombreux laboratoires comptent sur une image imprimée ou capturée plutôt qu’à l’œil.
• L’estimation à l’œil est la méthode la plus faible : les estimations sans comptage sont celles qui varient le plus d’un observateur à l’autre. Compter sur une image capturée, ou avec une analyse d’image que vous avez vérifiée, est plus reproductible.

Pour ce même groupe de travail, les valeurs inférieures ou égales à 5 % et supérieures ou égales à 30 % étaient les plages dans lesquelles le Ki-67 était jugé suffisamment fiable pour éclairer le pronostic dans le cancer du sein précoce ; les valeurs intermédiaires concordaient moins bien d’un laboratoire à l’autre. Les seuils cliniques relèvent de la recommandation propre au type de tumeur, pas de cette page.

Combien de noyaux compter

Un comptage est un échantillon, et son incertitude diminue avec la racine carrée du nombre compté. L’intervalle affiché par le calculateur est l’intervalle de Wilson pour une proportion. Pour planifier, l’approximation normale habituelle suffit : pour un index attendu p et une marge souhaitée de ± m (tous deux exprimés en fractions), le nombre de noyaux nécessaires pour un intervalle à 95 % est d’environ :

n = 1,96² × p × (1 − p) ÷ m²

Il s’agit uniquement de l’erreur de comptage. Elle ne dit rien des champs que vous avez choisis ni de l’endroit où vous avez placé la limite entre positif et négatif : c’est pourquoi une méthode fixe compte davantage qu’un très grand comptage.

Obtenir le même score avec un logiciel

Les logiciels d’analyse d’images obtiennent ces scores par la même arithmétique, l’œil étant remplacé par une mesure. Ils repèrent chaque noyau de la région, séparent le DAB brun de l’hématoxyline bleue par déconvolution des couleurs, mesurent la densité optique DAB moyenne de chaque noyau et le classent selon des seuils que vous fixez : un seuil pour positif ou négatif, trois pour 1+, 2+ et 3+.

• QuPath (gratuit, open source) : Positive cell detection avec un seuil donne le pourcentage de positifs ; avec trois seuils, il indique aussi le H-score.
• Fiji / ImageJ (gratuit) : Colour Deconvolution avec les vecteurs H DAB, puis seuillage et comptage ; l’arithmétique du score vous revient.
• SlideScope : compte les noyaux de la région que vous choisissez, classe chacun d’eux et indique ensemble le pourcentage de positifs, le H-score et le score d’Allred, avec les mêmes définitions que QuPath. Vous pouvez aussi poser la question en langage courant avec Ask Your Slide ; chaque nombre provient de l’outil local, avec des contours à vérifier. Usage de recherche uniquement.

Quel que soit l’outil, les seuils sont des choix : consignez-les dans vos méthodes, vérifiez les contours sur l’image et gardez-les identiques pour toutes les lames que vous comparez. Pas à pas : comment quantifier un marquage IHC.

Questions

Sources

• Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
• Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (comptage en hot-spot d’au moins 500 cellules)
• Documentation QuPath : index de marquage Ki67 par Positive cell detection
• NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1 : intervalles de confiance pour une proportion (méthode de Wilson)

Ces calculateurs effectuent de l’arithmétique pour la recherche et l’enseignement. Ce ne sont pas des outils de diagnostic : le score destiné à la prise en charge des patients suit la technique validée, la recommandation en vigueur pour ce marqueur et le jugement d’un pathologiste.