ניקוד IHC
מחשבון מדד Ki-67
הזינו את הגרעינים החיוביים ל-Ki-67 ואת הגרעינים שספרתם, וקבלו את מדד הסימון באחוזים, עם רווח של 95 % שמראה עד כמה הספירה לבדה עלולה לסטות. מחשבון שני אומר לכם כמה גרעינים לספור לרמת הדיוק שאתם צריכים. הנוסחה, שיטות הספירה והמקורות שלהן מופיעים בהמשך.
איך מחשבים את מדד Ki-67
Ki-67 הוא חלבון גרעיני שקיים בתאים הנמצאים במחזור התא ונעדר מתאים במנוחה, ולכן שיעור גרעיני הגידול שנצבעים עבורו הוא מדד לשגשוג. מדד Ki-67 (שנקרא גם מדד הסימון או מדד השגשוג) הוא השיעור הזה באחוזים.
מדד Ki-67 (%) = גרעיני גידול חיוביים ÷ (גרעיני גידול חיוביים + שליליים) × 100
דוגמה פתורה: 180 גרעיני גידול חומים (חיוביים) ו-820 כחולים (שליליים) הם 1,000 גרעינים בסך הכול, ולכן המדד הוא 180 ÷ 1,000 × 100 = 18 %. ספירה של 1,000 גרעינים יכולה לקבע אותו רק לטווח של כ-15.7 % עד 20.5 %; אותם 18 % מתוך 200 גרעינים יכולים להיות בכל מקום בין כ-13 % לכ-24 %.
כל צביעה גרעינית מעל הרקע נחשבת בדרך כלל חיובית, בכל עוצמה; סופרים רק גרעיני גידול, לא לימפוציטים, סטרומה או אנדותל.
איפה לספור: החתך כולו או מוקד חם
צביעת Ki-67 כמעט אף פעם אינה אחידה, ולכן המקום שבו סופרים משנה את התוצאה יותר מהחשבון. השתמשו בשיטה שההנחיה לסוג הגידול שלכם קובעת, וציינו באיזו שיטה השתמשתם.
- גלובלית (סרטן השד): ה-International Ki67 in Breast Cancer Working Group ממליצה על שיטה ויזואלית מתוקננת שמנקדת שדות המייצגים את טווח הצביעה לאורך החתך ורושמת ציון גלובלי משוקלל, במקום המוקד החם בלבד, שהשונות בו בין צופים הייתה גדולה יותר.
- מוקד חם (גידולים נוירואנדוקריניים): הדירוג קורא את המדד באזור שבו הסימון הגבוה ביותר, עם לפחות 500 תאי גידול שנספרו בו, ומעבדות רבות סופרות מתמונה מודפסת או מצולמת ולא בעין.
- הערכה בעין היא השיטה החלשה ביותר: הערכות בלי ספירה הן בעלות השונות הגדולה ביותר בין צופים. ספירה על תמונה מצולמת, או עם ניתוח תמונה שבדקתם, ניתנת לשחזור טוב יותר.
לפי אותה קבוצת עבודה, ערכים של 5 % ומטה ושל 30 % ומעלה היו הטווחים שבהם Ki-67 נחשב אמין מספיק כדי לתרום להערכת הפרוגנוזה בסרטן שד מוקדם; ההסכמה בין מעבדות על ערכי הביניים הייתה נמוכה יותר. ערכי סף קליניים שייכים להנחיה לסוג הגידול, לא לדף הזה.
כמה גרעינים לספור
ספירה היא מדגם, ואי-הוודאות שלה קטנה עם השורש הריבועי של מספר הנספרים. הרווח שהמחשבון מציג הוא רווח Wilson לפרופורציה. לתכנון, הקירוב הנורמלי הרגיל מספיק: עבור מדד צפוי p ומרווח רצוי ± m (שניהם כשברים), מספר הגרעינים הדרוש לרווח של 95 % הוא בערך:
n = 1.96² × p × (1 − p) ÷ m²
| מדד צפוי | ± 5 נקודות | ± 3 נקודות | ± 2 נקודות |
|---|---|---|---|
| 5 % | 73 | 203 | 457 |
| 10 % | 139 | 385 | 865 |
| 20 % | 246 | 683 | 1,537 |
| 30 % | 323 | 897 | 2,017 |
| 50 % | 385 | 1,068 | 2,401 |
זו שגיאת הספירה בלבד. היא לא אומרת דבר על השדות שבחרתם או על המקום שבו מתחתם את הקו בין חיובי לשלילי, ולכן שיטה קבועה חשובה יותר מספירה גדולה מאוד.
אותו ציון מתוכנה
תוכנות לניתוח תמונה מגיעות לציונים האלה באותו חשבון, כשמדידה מחליפה את העין. הן מאתרות כל גרעין באזור, מפרידות את צבע ה-DAB החום מההמטוקסילין הכחול בפירוק צבעים (colour deconvolution), מודדות את הצפיפות האופטית הממוצעת של DAB בכל גרעין ומדרגות אותו לפי ספים שאתם קובעים: סף אחד לחיובי או שלילי, ושלושה ספים ל-1+, 2+ ו-3+.
- QuPath (חינמי, קוד פתוח): Positive cell detection עם סף אחד נותן את אחוז החיוביים; עם שלושה ספים הוא מדווח גם על H-score.
- Fiji / ImageJ (חינמי): Colour Deconvolution עם וקטורי H DAB, ואחר כך סף וספירה; את חישוב הציון תעשו בעצמכם.
- SlideScope: סופר את הגרעינים באזור שבחרתם, מדרג כל אחד מהם ומדווח על אחוז החיוביים, H-score וציון Allred יחד, לפי אותן הגדרות של QuPath. אפשר גם לשאול בשפה פשוטה עם Ask Your Slide; כל מספר מגיע מהכלי המקומי, עם קווי מתאר לבדיקה. לשימוש מחקרי בלבד.
בכל כלי שתבחרו, הספים הם בחירה שלכם: כתבו אותם בפרק השיטות, בדקו את קווי המתאר מול התמונה, והשאירו אותם קבועים בכל השקופיות שאתם משווים. צעד אחר צעד: איך לכמת צביעת IHC.
שאלות
איך מחשבים את מדד Ki-67?
חלקו את מספר גרעיני הגידול החיוביים ל-Ki-67 בכל גרעיני הגידול שנספרו (חיוביים ועוד שליליים) והכפילו ב-100. עם 180 חיוביים מתוך 1,000 גרעינים, המדד הוא 18 %.
כמה תאים צריך לספור עבור Ki-67?
זה תלוי בהנחיה לסוג הגידול ובדיוק שאתם צריכים. בדירוג של גידולים נוירואנדוקריניים סופרים לפחות 500 תאי גידול במוקד החם. מבחינה סטטיסטית, כ-700 גרעינים נותנים ± 3 נקודות אחוז במדד של כ-20 %, וכ-250 נותנים ± 5.
האם לספור Ki-67 במוקדים חמים או לאורך החתך כולו?
פעלו לפי ההנחיה לסוג הגידול. ה-International Ki67 in Breast Cancer Working Group ממליצה על ציון גלובלי משוקלל לאורך החתך; הדירוג של גידולים נוירואנדוקריניים משתמש במוקד החם. ציינו תמיד באיזו שיטה השתמשתם.
מהו מדד Ki-67 גבוה?
אין ערך חיתוך אחד: הוא תלוי בסוג הגידול ובהנחיה. בסרטן שד מוקדם, ה-International Ki67 Working Group קבעה ש-5 % ומטה ו-30 % ומעלה אמינים מספיק כדי לתרום להערכת הפרוגנוזה. לגבי תוצאה של מטופל, שאלו את הפתולוג המדווח או את הרופא המטפל.
האם תוכנה יכולה לספור Ki-67?
כן. ניתוח תמונה מאתר כל גרעין באזור ומסווג אותו כחיובי או שלילי לפי צביעת ה-DAB שלו; גם QuPath וגם SlideScope מדווחים כך על אחוז החיוביים. קבוצת העבודה מתארת ניקוד אוטומטי כעדיין בשלב מחקרי לשימוש קליני, לכן בדקו את קווי המתאר ואת הספים והתייחסו לתוצאה כתוצר מחקרי.
האם המחשבון הזה חינמי?
כן. הוא רץ בדפדפן שלכם ולא שולח דבר לשום מקום. SlideScope, אפליקציית המיקרוסקופיה והפתולוגיה למחשב של אותו צוות, היא אפליקציה בתשלום עם ספריית דוגמאות חינמית (כל הכלים) ומנוי לתמונות שלכם.
מקורות
- Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
- Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (ספירה במוקד חם של לפחות 500 תאים)
- התיעוד של QuPath: מדד הסימון של Ki67 באמצעות Positive cell detection
- NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1: רווחי סמך לפרופורציה (שיטת Wilson)
המחשבונים האלה מבצעים חישובים למחקר ולהוראה. הם אינם כלי אבחוני: ניקוד לצורך טיפול בחולים נעשה לפי הבדיקה המתוקפת, ההנחיה העדכנית לאותו סמן ושיקול דעתו של פתולוג.
נקדו את השקופית במקום לספור ביד
SlideScope סופר את הגרעינים באזור בשקופית שלכם, מדרג כל אחד מהם לפי צביעת ה-DAB שלו, ומדווח על אחוז החיוביים, H-score וציון Allred עם קווי המתאר לבדיקה, במחשב שלכם. או הקלידו את השאלה: Ask Your Slide מריץ את אותם כלים ומציג את הראיות. לשימוש מחקרי בלבד. נסו כל כלי בחינם על הדוגמאות המובנות; פתיחת התמונות שלכם דורשת מנוי. כבר החלטתם? הרשמה למנוי עכשיו.