Kalkulator indeksu Ki-67

Kalkulator indeksu Ki-67

Jak oblicza się indeks Ki-67

Ki-67 to białko jądrowe obecne w komórkach znajdujących się w cyklu komórkowym i nieobecne w komórkach spoczynkowych, dlatego udział jąder komórek nowotworowych, które się na nie barwią, jest miarą proliferacji. Indeks Ki-67 (nazywany też indeksem znakowania lub indeksem proliferacji) to ten udział wyrażony w procentach.

Indeks Ki-67 (%) = dodatnie jądra komórek nowotworowych ÷ (dodatnie + ujemne jądra komórek nowotworowych) × 100

Przykład obliczenia: 180 brązowych (dodatnich) i 820 niebieskich (ujemnych) jąder komórek nowotworowych to łącznie 1 000 jąder, więc indeks wynosi 180 ÷ 1 000 × 100 = 18%. Zliczenie 1 000 jąder pozwala ustalić tę wartość tylko z dokładnością do przedziału około 15,7% do 20,5%; te same 18% z 200 jąder mogłyby wynosić w rzeczywistości od około 13% do 24%.

Każde barwienie jądra powyżej tła zwykle uznaje się za dodatnie, niezależnie od jego siły; liczy się tylko jądra komórek nowotworowych, a nie limfocytów, podścieliska czy śródbłonka.

Gdzie liczyć: cały przekrój czy hotspot

Barwienie Ki-67 rzadko jest równomierne, więc miejsce zliczania zmienia wynik bardziej niż sama arytmetyka. Stosuj metodę wskazaną w wytycznych dla danego typu nowotworu i podawaj, której użyłeś.

• Metoda globalna (rak piersi): International Ki67 in Breast Cancer Working Group zaleca standaryzowaną metodę wizualną, która ocenia pola odzwierciedlające zakres barwienia w całym przekroju i zapisuje ważony wynik globalny zamiast samego hotspotu, który bardziej różnił się między obserwatorami.
• Hotspot (nowotwory neuroendokrynne): przy ustalaniu stopnia złośliwości indeks odczytuje się w obszarze o najwyższym znakowaniu, licząc tam co najmniej 500 komórek nowotworowych, a wiele laboratoriów liczy na wydrukowanym lub zarejestrowanym obrazie, a nie na oko.
• Szacowanie na oko to najsłabsza metoda: szacunki bez zliczania najbardziej różnią się między obserwatorami. Liczenie na zarejestrowanym obrazie albo za pomocą sprawdzonej przez Ciebie analizy obrazu jest bardziej powtarzalne.

Według tej samej grupy roboczej wartości 5% lub mniej oraz 30% lub więcej to zakresy, w których Ki-67 uznano za wystarczająco wiarygodny, aby uwzględniać go w rokowaniu we wczesnym raku piersi; wartości pośrednie były słabiej zgodne między laboratoriami. Progi kliniczne należą do wytycznych dla danego typu nowotworu, a nie do tej strony.

Ile jąder policzyć

Zliczenie to próba, a jego niepewność maleje z pierwiastkiem kwadratowym z liczby zliczonych jąder. Przedział pokazywany przez kalkulator to przedział Wilsona dla proporcji. Do planowania wystarcza zwykłe przybliżenie normalne: dla oczekiwanego indeksu p i pożądanego marginesu ± m (oba jako ułamki) liczba jąder potrzebna do 95-procentowego przedziału wynosi około:

n = 1,96² × p × (1 − p) ÷ m²

To wyłącznie błąd zliczenia. Nie mówi nic o tym, które pola wybrałeś ani gdzie postawiłeś granicę między dodatnimi a ujemnymi, dlatego stała metoda jest ważniejsza niż bardzo duża liczba zliczonych jąder.

Ten sam wynik z oprogramowania

Oprogramowanie do analizy obrazu dochodzi do tych wyników tą samą arytmetyką, tylko oko zastępuje pomiar. Znajduje każde jądro w obszarze, oddziela brązowe barwienie DAB od niebieskiej hematoksyliny metodą dekonwolucji barw, mierzy średnią gęstość optyczną DAB każdego jądra i klasyfikuje je według ustawionych przez Ciebie progów: jednego dla podziału na dodatnie i ujemne, trzech dla 1+, 2+ i 3+.

• QuPath (bezpłatny, open source): Positive cell detection z jednym progiem daje odsetek dodatnich; z trzema progami podaje też H-score.
• Fiji / ImageJ (bezpłatne): Colour Deconvolution z wektorami H DAB, potem progowanie i zliczanie; obliczenie wyniku należy do Ciebie.
• SlideScope: liczy jądra w wybranym przez Ciebie obszarze, klasyfikuje każde z nich i podaje jednocześnie odsetek dodatnich, H-score i wynik Allreda, według tych samych definicji co QuPath. Możesz też zapytać zwykłym językiem za pomocą Ask Your Slide; każda liczba pochodzi z lokalnego narzędzia, z obrysami do sprawdzenia. Wyłącznie do zastosowań badawczych.

Niezależnie od narzędzia progi są wyborem: opisz je w metodach, porównaj obrysy z obrazem i nie zmieniaj ich między preparatami, które porównujesz. Krok po kroku: jak kwantyfikować barwienie IHC.

Pytania

Źródła

• Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
• Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (zliczanie w hotspocie co najmniej 500 komórek)
• Dokumentacja QuPath: indeks znakowania Ki67 za pomocą Positive cell detection
• NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1: przedziały ufności dla proporcji (metoda Wilsona)

Te kalkulatory wykonują obliczenia na potrzeby badań naukowych i dydaktyki. Nie są narzędziem diagnostycznym: ocena na potrzeby opieki nad pacjentem odbywa się według zwalidowanego testu, aktualnych wytycznych dla danego markera i oceny patologa.