Ki-67 指數的計算方式
Ki-67 是一種細胞核蛋白，存在於處於細胞週期中的細胞，靜止細胞則沒有，因此被它染色的腫瘤細胞核所佔比例，可作為細胞增生的指標。Ki-67 指數（也稱為標記指數或增生指數）就是以百分比表示的這個比例。
Ki-67 指數（%）= 陽性腫瘤細胞核 ÷（陽性 + 陰性腫瘤細胞核）× 100
計算範例：180 個棕色（陽性）與 820 個藍色（陰性）腫瘤細胞核，共 1,000 個細胞核，因此指數為 180 ÷ 1,000 × 100 = 18 %。計數 1,000 個細胞核只能將結果確定在約 15.7 % 到 20.5 % 之間；同樣的 18 % 若來自 200 個細胞核，則可能落在約 13 % 到 24 % 之間的任何位置。
任何高於背景的細胞核染色，不論強弱，通常都算陽性；只計數腫瘤細胞核，不計淋巴球、間質或內皮細胞。
在哪裡計數：整張切片或熱點
Ki-67 染色很少是均勻的，因此計數位置對結果的影響比算術本身更大。請採用您的腫瘤類型指引所指定的方法，並註明您用的是哪一種。
- 整體評估（乳癌）：International Ki67 in Breast Cancer Working Group 建議採用標準化的目視方法：為能代表整張切片染色範圍的視野評分，並記錄加權的整體分數，而非只看熱點，因為後者在觀察者之間的差異較大。
- 熱點（神經內分泌腫瘤）：分級時讀取標記最高區域的指數，並在該處至少計數 500 個腫瘤細胞；許多實驗室依據列印或擷取的影像計數，而非以肉眼估計。
- 目測估計是最弱的方法：不經計數的估計在觀察者之間差異最大。在擷取的影像上計數，或使用您已檢查過的影像分析，再現性較佳。
同一工作小組認為，在早期乳癌中，Ki-67 為 5 % 以下以及 30 % 以上時，可靠程度足以作為預後參考；介於兩者之間的數值，在實驗室之間的一致性較差。臨床閾值應以該腫瘤類型的指引為準，而非本頁。
應計數多少個細胞核
計數是一種抽樣，其不確定性會隨計數數量的平方根而縮小。計算器顯示的區間是比例的 Wilson 區間。用於規劃時，常用的常態近似已經足夠：對於預期指數 p 與所需誤差範圍 ± m（兩者皆以小數表示），95 % 區間所需的細胞核數約為：
n = 1.96² × p × (1 − p) ÷ m²
| 預期指數 | ± 5 個百分點 | ± 3 個百分點 | ± 2 個百分點 |
|---|---|---|---|
| 5 % | 73 | 203 | 457 |
| 10 % | 139 | 385 | 865 |
| 20 % | 246 | 683 | 1,537 |
| 30 % | 323 | 897 | 2,017 |
| 50 % | 385 | 1,068 | 2,401 |
這只是計數誤差。它無法反映您選了哪些視野，也無法反映您在陽性與陰性之間如何劃界，因此固定的方法比極大的計數量更重要。
用軟體得到相同的分數
影像分析軟體以相同的算術得出這些分數，只是以量測取代肉眼判讀。軟體會找出區域內的每個細胞核，以顏色反卷積將棕色的 DAB 染色與藍色的蘇木素分開，量測每個細胞核的平均 DAB 光密度，再依您設定的閾值分級：一個閾值區分陽性與陰性，三個閾值區分 1+、2+ 與 3+。
- QuPath（免費、開源）：Positive cell detection 使用一個閾值時提供陽性百分比；使用三個閾值時也會回報 H-score。
- Fiji / ImageJ（免費）：以 H DAB 向量執行 Colour Deconvolution，再設定閾值並計數；評分的算術需由您自行完成。
- SlideScope：在您選擇的區域內計數細胞核，為每個細胞核分級，並同時回報陽性百分比、H-score 與 Allred 分數，採用與 QuPath 相同的定義。您也可以透過 Ask Your Slide 以日常用語提問；每個數字都來自本機工具，並附有可供核對的輪廓。僅供研究使用。
無論使用哪一種工具，閾值都是您的選擇：請寫入方法章節、對照影像檢查輪廓，並在要相互比較的所有玻片上維持不變。逐步說明：如何定量 IHC 染色。
常見問題
如何計算 Ki-67 指數？
將 Ki-67 陽性腫瘤細胞核數除以計數的全部腫瘤細胞核數（陽性加陰性），再乘以 100。1,000 個細胞核中有 180 個陽性時，指數為 18 %。
Ki-67 應計數多少個細胞？
這取決於該腫瘤類型的指引與您所需的精確度。神經內分泌腫瘤分級要求在熱點至少計數 500 個腫瘤細胞。以統計而言，當指數接近 20 % 時，約 700 個細胞核可達 ± 3 個百分點，約 250 個可達 ± 5 個百分點。
Ki-67 應該在熱點計數，還是在整張切片上計數？
請依循該腫瘤類型的指引。International Ki67 in Breast Cancer Working Group 建議在整張切片上採用加權整體分數；神經內分泌腫瘤分級則採用熱點。請務必註明您採用哪一種。
Ki-67 指數多少算高？
沒有單一的切點：這取決於腫瘤類型與指引。在早期乳癌中，International Ki67 Working Group 認為 5 % 以下以及 30 % 以上的數值，可靠程度足以作為預後參考。若是病人的檢查結果，請詢問出具報告的病理科醫師或主治醫師。
軟體可以計數 Ki-67 嗎？
可以。影像分析會偵測區域內的每個細胞核，並依 DAB 染色將其分類為陽性或陰性；QuPath 與 SlideScope 都是以這種方式回報陽性百分比。該工作小組認為自動化評分用於臨床仍屬研究階段，因此請檢查輪廓與閾值，並將結果視為研究產出。
這個計算器是免費的嗎？
是的。它在您的瀏覽器中執行，不會將任何資料傳送到任何地方。SlideScope 是由同一團隊開發的桌面顯微影像與病理應用程式，屬於付費應用程式，提供免費範例庫（可使用所有工具），並以訂閱方式開放您自己的影像。
資料來源
- Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
- Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020（在熱點至少計數 500 個細胞）
- QuPath 說明文件：以 Positive cell detection 計算 Ki67 標記指數
- NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1：比例的信賴區間（Wilson 方法）
這些計算器只為研究與教學進行算術。它們不是診斷工具：用於病人照護的評分，應依循經過確效的檢測、該標記的現行指引，以及病理科醫師的判斷。
直接為玻片評分，不必手動計數
SlideScope 在您自己的電腦上計數玻片某個區域內的細胞核，依 DAB 染色為每個細胞核分級，並回報陽性百分比、H-score 與 Allred 分數，附有可供核對的輪廓。也可以直接輸入問題：Ask Your Slide 會執行相同的工具並呈現依據。僅供研究使用。先用內建範例免費試用所有工具；開啟您自己的影像需要訂閱。已經決定了嗎？立即訂閱。