Калькулятор індексу Ki-67

Калькулятор індексу Ki-67

Як розраховується індекс Ki-67

Ki-67 — ядерний білок, який є в клітинах, що перебувають у клітинному циклі, і відсутній у клітинах у стані спокою, тому частка ядер пухлинних клітин, забарвлених на нього, слугує мірою проліферації. Індекс Ki-67 (його також називають індексом мічення або індексом проліферації) — це ця частка у відсотках.

Індекс Ki-67 (%) = позитивні ядра пухлинних клітин ÷ (позитивні + негативні ядра пухлинних клітин) × 100

Розібраний приклад: 180 коричневих (позитивних) і 820 синіх (негативних) ядер пухлинних клітин — це загалом 1,000 ядер, тому індекс дорівнює 180 ÷ 1,000 × 100 = 18 %. Підрахунок 1,000 ядер дає змогу визначити його лише в межах приблизно від 15.7 % до 20.5 %; ті самі 18 % за 200 ядрами насправді можуть бути будь-де приблизно від 13 % до 24 %.

Зазвичай позитивним вважають будь-яке ядерне забарвлення вище фону, хоч би якою була його сила; рахують лише ядра пухлинних клітин, а не лімфоцити, строму чи ендотелій.

Де рахувати: увесь зріз чи гаряча точка

Забарвлення Ki-67 рідко буває рівномірним, тому місце підрахунку впливає на результат сильніше, ніж арифметика. Використовуйте метод, указаний у настанові для вашого типу пухлини, і зазначайте, який метод ви застосували.

• Глобальний підрахунок (рак молочної залози): International Ki67 in Breast Cancer Working Group рекомендує стандартизований візуальний метод: оцінюють поля, що відображають увесь діапазон забарвлення на зрізі, і записують зважений глобальний бал, а не лише гарячу точку, оцінка за якою більше різнилася між спостерігачами.
• Гаряча точка (нейроендокринні пухлини): під час визначення ступеня злоякісності індекс оцінюють у ділянці з найбільшою часткою мічених ядер, рахуючи там щонайменше 500 пухлинних клітин, і багато лабораторій рахують за роздрукованим або знятим зображенням, а не на око.
• Оцінка на око — найслабший метод: оцінки без підрахунку найбільше різняться між спостерігачами. Підрахунок на знятому зображенні або за допомогою перевіреного вами аналізу зображень краще відтворюється.

За даними тієї самої робочої групи, значення 5 % і менше та 30 % і більше — це діапазони, у яких Ki-67 визнали достатньо надійним для оцінки прогнозу при ранньому раку молочної залози; проміжні значення гірше узгоджувалися між лабораторіями. Клінічні пороги визначає настанова для цього типу пухлини, а не ця сторінка.

Скільки ядер рахувати

Підрахунок — це вибірка, і його невизначеність зменшується пропорційно квадратному кореню з кількості порахованих ядер. Інтервал, який показує калькулятор, — це інтервал Вілсона для частки. Для планування досить звичайного нормального наближення: за очікуваного індексу p і бажаної похибки ± m (обидва в частках одиниці) для інтервалу 95 % потрібно приблизно стільки ядер:

n = 1.96² × p × (1 − p) ÷ m²

Це лише похибка підрахунку. Вона нічого не говорить про те, які поля ви обрали і де провели межу між позитивними й негативними ядрами, тому фіксований метод важливіший за дуже великий підрахунок.

Як отримати той самий бал за допомогою програми

Програми аналізу зображень доходять до цих балів тією самою арифметикою, лише замість ока працює вимірювання. Програма знаходить кожне ядро в ділянці, відокремлює коричневий барвник DAB від синього гематоксиліну методом колірної деконволюції, вимірює середню оптичну густину DAB у кожному ядрі й відносить ядро до класу за заданими вами порогами: один поріг ділить ядра на позитивні й негативні, три пороги — на 1+, 2+ і 3+.

• QuPath (безкоштовна програма з відкритим кодом): Positive cell detection з одним порогом дає відсоток позитивних клітин, а з трьома порогами повідомляє також H-score.
• Fiji / ImageJ (безкоштовно): Colour Deconvolution з векторами H DAB, потім поріг і підрахунок; арифметику оцінки ви виконуєте самі.
• SlideScope: рахує ядра в обраній вами ділянці, відносить кожне до ступеня забарвлення й повідомляє відсоток позитивних клітин, H-score і бал Allred разом, за тими самими визначеннями, що й QuPath. Можна також запитати звичайними словами за допомогою Ask Your Slide; кожне число отримано локальним інструментом і супроводжується контурами для перевірки. Лише для дослідницьких цілей.

Хоч би який інструмент ви обрали, пороги — це ваш вибір: зазначте їх у розділі методів, звірте контури із зображенням і не змінюйте пороги між слайдами, які порівнюєте. Покроково: як кількісно оцінити ІГХ-забарвлення.

Запитання

Джерела

• Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
• Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (підрахунок щонайменше 500 клітин у гарячій точці)
• Документація QuPath: індекс мічення Ki67 за допомогою Positive cell detection
• NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1: довірчі інтервали для частки (метод Вілсона)

Ці калькулятори виконують арифметичні розрахунки для досліджень і навчання. Вони не є діагностичним інструментом: оцінка для лікування пацієнтів ґрунтується на валідованому тесті, чинних рекомендаціях для цього маркера та судженні патолога.