Калькулятор индекса Ki-67

Калькулятор индекса Ki-67

Как рассчитывается индекс Ki-67

Ki-67 — ядерный белок, который есть в клетках, находящихся в клеточном цикле, и отсутствует в покоящихся клетках, поэтому доля ядер опухолевых клеток, окрашенных на него, служит мерой пролиферации. Индекс Ki-67 (его также называют индексом мечения или индексом пролиферации) — это эта доля в процентах.

Индекс Ki-67 (%) = положительные ядра опухолевых клеток ÷ (положительные + отрицательные ядра опухолевых клеток) × 100

Разобранный пример: 180 коричневых (положительных) и 820 синих (отрицательных) ядер опухолевых клеток — это всего 1 000 ядер, поэтому индекс равен 180 ÷ 1 000 × 100 = 18 %. Подсчёт 1 000 ядер позволяет определить его лишь в пределах примерно от 15,7 % до 20,5 %; те же 18 % по 200 ядрам могут на деле оказаться где угодно примерно от 13 % до 24 %.

Обычно положительным считается любое ядерное окрашивание выше фона, какой бы ни была его сила; подсчитываются только ядра опухолевых клеток, а не лимфоциты, строма или эндотелий.

Где считать: весь срез или горячая точка

Окрашивание Ki-67 редко бывает равномерным, поэтому место подсчёта влияет на результат сильнее, чем арифметика. Используйте метод, указанный в руководстве для вашего типа опухоли, и укажите, какой метод вы применили.

• Глобальный подсчёт (рак молочной железы): International Ki67 in Breast Cancer Working Group рекомендует стандартизированный визуальный метод: оцениваются поля, отражающие весь диапазон окрашивания на срезе, и записывается взвешенный глобальный балл, а не только горячая точка, оценка по которой сильнее различалась между наблюдателями.
• Горячая точка (нейроэндокринные опухоли): при определении степени злокачественности индекс оценивают в участке с наибольшей долей меченых ядер, подсчитывая там не менее 500 опухолевых клеток, и многие лаборатории считают по распечатанному или снятому изображению, а не на глаз.
• Оценка на глаз — самый слабый метод: оценки без подсчёта сильнее всего различаются между наблюдателями. Подсчёт на снятом изображении или с помощью проверенного вами анализа изображений лучше воспроизводится.

По данным той же рабочей группы, значения 5 % и ниже и 30 % и выше — это диапазоны, в которых Ki-67 был признан достаточно надёжным для оценки прогноза при раннем раке молочной железы; промежуточные значения хуже согласовывались между лабораториями. Клинические пороги определяет руководство для данного типа опухоли, а не эта страница.

Сколько ядер подсчитывать

Подсчёт — это выборка, и его неопределённость уменьшается пропорционально квадратному корню из числа подсчитанных ядер. Интервал, который показывает калькулятор, — это интервал Уилсона для доли. Для планирования достаточно обычного нормального приближения: при ожидаемом индексе p и желаемой погрешности ± m (оба в долях единицы) для интервала 95 % нужно примерно столько ядер:

n = 1,96² × p × (1 − p) ÷ m²

Это только ошибка подсчёта. Она ничего не говорит о том, какие поля вы выбрали и где провели границу между положительными и отрицательными ядрами, поэтому фиксированный метод важнее очень большого подсчёта.

Как получить тот же балл с помощью программы

Программы анализа изображений приходят к этим баллам с помощью той же арифметики, только вместо глаза работает измерение. Программа находит каждое ядро в области, отделяет коричневый краситель DAB от синего гематоксилина методом цветовой деконволюции, измеряет среднюю оптическую плотность DAB в каждом ядре и относит ядро к классу по заданным вами порогам: один порог делит ядра на положительные и отрицательные, три порога — на 1+, 2+ и 3+.

• QuPath (бесплатная программа с открытым исходным кодом): Positive cell detection с одним порогом даёт процент положительных клеток, а с тремя порогами сообщает и H-score.
• Fiji / ImageJ (бесплатно): Colour Deconvolution с векторами H DAB, затем порог и подсчёт; арифметику оценки вы выполняете сами.
• SlideScope: подсчитывает ядра в выбранной вами области, относит каждое к степени окрашивания и сообщает процент положительных клеток, H-score и балл Allred вместе, по тем же определениям, что и QuPath. Можно также спросить обычными словами с помощью Ask Your Slide; каждое число получено локальным инструментом и сопровождается контурами для проверки. Только для исследовательских целей.

Какой бы инструмент вы ни выбрали, пороги — это ваш выбор: укажите их в разделе методов, сверьте контуры с изображением и не меняйте пороги между слайдами, которые сравниваете. Пошагово: как количественно оценить ИГХ-окрашивание.

Вопросы

Источники

• Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
• Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (подсчёт не менее 500 клеток в горячей точке)
• Документация QuPath: индекс мечения Ki67 с помощью Positive cell detection
• NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1: доверительные интервалы для доли (метод Уилсона)

Эти калькуляторы выполняют арифметические расчёты для исследований и обучения. Они не являются диагностическим инструментом: оценка для лечения пациентов основывается на валидированном тесте, действующих рекомендациях для данного маркера и суждении патолога.