Calculadora do índice Ki-67

Calculadora do índice Ki-67

Como se calcula o índice Ki-67

O Ki-67 é uma proteína nuclear presente nas células que estão no ciclo celular e ausente nas células em repouso, pelo que a fração de núcleos tumorais que coram para ela é uma medida da proliferação. O índice Ki-67 (também chamado índice de marcação ou índice de proliferação) é essa fração expressa em percentagem.

Índice Ki-67 (%) = núcleos tumorais positivos ÷ (núcleos tumorais positivos + negativos) × 100

Exemplo resolvido: 180 núcleos tumorais castanhos (positivos) e 820 azuis (negativos) perfazem 1000 núcleos, pelo que o índice é 180 ÷ 1000 × 100 = 18 %. Uma contagem de 1000 núcleos só permite situá-lo entre cerca de 15,7 % e 20,5 %; os mesmos 18 % obtidos a partir de 200 núcleos poderiam estar em qualquer ponto entre cerca de 13 % e 24 %.

Qualquer coloração nuclear acima do fundo conta normalmente como positiva, seja qual for a sua intensidade; só se contam os núcleos tumorais, não os linfócitos, o estroma nem o endotélio.

Onde contar: corte inteiro ou hot spot

A coloração de Ki-67 raramente é uniforme, pelo que o local onde conta altera o resultado mais do que a aritmética. Use o método indicado pela orientação para o seu tipo de tumor e diga qual usou.

• Global (cancro da mama): o International Ki67 in Breast Cancer Working Group recomenda um método visual padronizado que pontua campos representativos de toda a gama de coloração no corte e regista uma pontuação global ponderada, em vez de apenas o hot spot, que variava mais entre observadores.
• Hot spot (tumores neuroendócrinos): a graduação lê o índice na área de maior marcação, com pelo menos 500 células tumorais contadas nessa área, e muitos laboratórios contam a partir de uma imagem impressa ou capturada em vez de a olho.
• A estimativa a olho é o método mais fraco: as estimativas sem contagem são as que mais variam entre observadores. Contar numa imagem capturada, ou com uma análise de imagem que tenha verificado, é mais reprodutível.

Para o mesmo grupo de trabalho, valores de 5 % ou menos e de 30 % ou mais foram os intervalos em que o Ki-67 foi considerado suficientemente fiável para informar o prognóstico no cancro da mama precoce; os valores intermédios tiveram menor concordância entre laboratórios. Os limiares clínicos pertencem à orientação para o tipo de tumor, não a esta página.

Quantos núcleos contar

Uma contagem é uma amostra, e a sua incerteza diminui com a raiz quadrada do número contado. O intervalo que a calculadora mostra é o intervalo de Wilson para uma proporção. Para planear, basta a aproximação normal habitual: para um índice esperado p e uma margem pretendida de ± m (ambos como frações), os núcleos necessários para um intervalo de 95 % são aproximadamente:

n = 1,96² × p × (1 − p) ÷ m²

Isto é apenas o erro de contagem. Não diz nada sobre os campos que escolheu nem sobre onde traçou a linha entre positivo e negativo, e é por isso que um método fixo importa mais do que uma contagem muito grande.

Obter a mesma pontuação com software

O software de análise de imagem chega a estas pontuações com a mesma aritmética, substituindo o olho por uma medição. Encontra todos os núcleos da região, separa a coloração castanha de DAB da hematoxilina azul por desconvolução de cor, mede a densidade ótica média de DAB de cada núcleo e gradua-o segundo os limiares que definir: um limiar para positivo ou negativo, três para 1+, 2+ e 3+.

• QuPath (gratuito, de código aberto): a Positive cell detection com um limiar dá a percentagem de positivos; com três limiares, indica também o H-score.
• Fiji / ImageJ (gratuito): Colour Deconvolution com os vetores H DAB e, depois, limiar e contagem; a aritmética da pontuação fica a seu cargo.
• SlideScope: conta os núcleos na região que escolher, gradua cada um e indica em conjunto a percentagem de positivos, o H-score e a pontuação de Allred, com as mesmas definições do QuPath. Também pode perguntar em linguagem corrente com o Ask Your Slide; cada número provém da ferramenta local, com contornos para verificar. Apenas para uso em investigação.

Seja qual for a ferramenta, os limiares são escolhas suas: registe-os nos métodos, compare os contornos com a imagem e mantenha-os fixos em todas as lâminas que comparar. Passo a passo: como quantificar a coloração de IHQ.

Perguntas

Fontes

• Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
• Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (contagem no hot spot de pelo menos 500 células)
• Documentação do QuPath: índice de marcação Ki67 por deteção de células positivas
• NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1: intervalos de confiança para uma proporção (o método de Wilson)

Estas calculadoras fazem contas para investigação e ensino. Não são uma ferramenta de diagnóstico: a pontuação para cuidados ao doente segue o ensaio validado, a orientação em vigor para esse marcador e o critério de um patologista.