Công cụ tính chỉ số Ki-67

Công cụ tính chỉ số Ki-67

Cách tính chỉ số Ki-67

Ki-67 là một protein nhân có mặt ở các tế bào đang trong chu kỳ tế bào và vắng mặt ở tế bào nghỉ, nên tỷ lệ nhân tế bào u bắt màu với nó là thước đo mức tăng sinh. Chỉ số Ki-67 (còn gọi là chỉ số đánh dấu hoặc chỉ số tăng sinh) là tỷ lệ đó tính theo phần trăm.

Chỉ số Ki-67 (%) = nhân tế bào u dương tính ÷ (nhân tế bào u dương tính + âm tính) × 100

Ví dụ minh họa: 180 nhân tế bào u màu nâu (dương tính) và 820 nhân màu xanh (âm tính) là tổng cộng 1.000 nhân, nên chỉ số là 180 ÷ 1.000 × 100 = 18 %. Số đếm 1.000 nhân chỉ xác định được giá trị đó trong khoảng 15,7 % đến 20,5 %; cùng mức 18 % từ 200 nhân có thể nằm ở bất kỳ đâu từ khoảng 13 % đến 24 %.

Mọi mức nhuộm nhân cao hơn nền thường được tính là dương tính, bất kể đậm hay nhạt; chỉ đếm nhân tế bào u, không đếm tế bào lympho, mô đệm hay nội mô.

Đếm ở đâu: toàn bộ lát cắt hay điểm nóng

Nhuộm Ki-67 hiếm khi đồng đều, nên vị trí đếm làm thay đổi kết quả nhiều hơn so với phép tính. Hãy dùng phương pháp mà hướng dẫn cho loại u của bạn quy định, và nêu rõ bạn đã dùng phương pháp nào.

• Toàn thể (ung thư vú): International Ki67 in Breast Cancer Working Group khuyến nghị một phương pháp quan sát chuẩn hóa: chấm điểm các vi trường đại diện cho dải mức nhuộm trên toàn lát cắt và ghi nhận một điểm toàn thể có trọng số, thay vì chỉ đếm điểm nóng, vốn dao động nhiều hơn giữa các người đọc.
• Điểm nóng (u thần kinh nội tiết): việc phân độ đọc chỉ số ở vùng có tỷ lệ đánh dấu cao nhất, đếm ít nhất 500 tế bào u ở đó, và nhiều phòng xét nghiệm đếm trên ảnh in hoặc ảnh chụp thay vì ước lượng bằng mắt.
• Ước lượng bằng mắt là phương pháp kém tin cậy nhất: các ước lượng không qua đếm dao động nhiều nhất giữa các người đọc. Đếm trên ảnh chụp, hoặc bằng phân tích ảnh mà bạn đã kiểm tra, cho kết quả lặp lại tốt hơn.

Theo chính nhóm làm việc đó, giá trị từ 5 % trở xuống và từ 30 % trở lên là những khoảng mà Ki-67 được đánh giá là đủ tin cậy để hỗ trợ tiên lượng trong ung thư vú giai đoạn sớm; các giá trị ở giữa ít nhất quán hơn giữa các phòng xét nghiệm. Ngưỡng lâm sàng thuộc về hướng dẫn cho từng loại u, không thuộc về trang này.

Cần đếm bao nhiêu nhân

Một lần đếm là một mẫu, và độ bất định của nó giảm theo căn bậc hai của số lượng đã đếm. Khoảng mà công cụ hiển thị là khoảng Wilson cho một tỷ lệ. Để lập kế hoạch, phép xấp xỉ chuẩn thông thường là đủ: với chỉ số dự kiến p và biên sai số mong muốn ± m (cả hai viết dưới dạng phân số thập phân), số nhân cần cho khoảng 95 % xấp xỉ là:

n = 1,96² × p × (1 − p) ÷ m²

Đây chỉ là sai số đếm. Nó không nói gì về việc bạn đã chọn những vi trường nào hay bạn vạch ranh giới giữa dương tính và âm tính ở đâu, và đó là lý do một phương pháp cố định quan trọng hơn một số đếm rất lớn.

Có được cùng điểm số bằng phần mềm

Phần mềm phân tích ảnh tính ra các điểm số này bằng cùng phép tính, chỉ thay mắt người bằng phép đo. Phần mềm tìm mọi nhân trong vùng, tách màu nâu của DAB khỏi màu xanh của hematoxylin bằng phương pháp tách màu (colour deconvolution), đo mật độ quang DAB trung bình của từng nhân và phân mức theo các ngưỡng bạn đặt: một ngưỡng cho dương tính hay âm tính, ba ngưỡng cho 1+, 2+ và 3+.

• QuPath (miễn phí, mã nguồn mở): Positive cell detection với một ngưỡng cho phần trăm dương tính; với ba ngưỡng, phần mềm báo cáo thêm H-score.
• Fiji / ImageJ (miễn phí): Colour Deconvolution với vector H DAB, rồi phân ngưỡng và đếm; phần tính điểm bạn phải tự làm.
• SlideScope: đếm nhân trong vùng bạn chọn, phân mức từng nhân và báo cáo cùng lúc phần trăm dương tính, H-score và điểm Allred, theo cùng định nghĩa với QuPath. Bạn cũng có thể hỏi bằng ngôn ngữ thông thường với Ask Your Slide; mọi con số đều đến từ công cụ chạy trên máy, kèm đường viền để kiểm tra. Chỉ dùng cho nghiên cứu.

Dù dùng công cụ nào, các ngưỡng đều là lựa chọn của bạn: hãy ghi chúng vào phần phương pháp, đối chiếu đường viền với ảnh và giữ cố định trên mọi tiêu bản bạn so sánh. Hướng dẫn từng bước: cách định lượng nhuộm IHC.

Câu hỏi

Nguồn

• Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
• Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (đếm ít nhất 500 tế bào ở điểm nóng)
• Tài liệu QuPath: chỉ số đánh dấu Ki67 bằng Positive cell detection
• NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1: khoảng tin cậy cho một tỷ lệ (phương pháp Wilson)

Các công cụ tính này chỉ làm phép tính phục vụ nghiên cứu và giảng dạy. Chúng không phải là công cụ chẩn đoán: việc chấm điểm phục vụ chăm sóc bệnh nhân phải tuân theo xét nghiệm đã được thẩm định, hướng dẫn hiện hành cho chất đánh dấu đó và nhận định của bác sĩ giải phẫu bệnh.