การให้คะแนน IHC
เครื่องคำนวณดัชนี Ki-67
กรอกจำนวนนิวเคลียสที่ให้ผลบวกต่อ Ki-67 และจำนวนนิวเคลียสที่คุณนับ เพื่อรับดัชนีการติดฉลากเป็นเปอร์เซ็นต์ พร้อมช่วง 95 % ที่แสดงว่าการนับเพียงอย่างเดียวอาจคลาดเคลื่อนได้เท่าใด เครื่องคำนวณตัวที่สองบอกว่าต้องนับนิวเคลียสกี่ตัวจึงจะได้ความแม่นยำตามที่ต้องการ สูตร วิธีนับ และแหล่งอ้างอิงอยู่ด้านล่าง
ดัชนี Ki-67 คำนวณอย่างไร
Ki-67 เป็นโปรตีนในนิวเคลียสที่พบในเซลล์ที่อยู่ในวัฏจักรเซลล์และไม่พบในเซลล์ระยะพัก สัดส่วนของนิวเคลียสเซลล์เนื้องอกที่ย้อมติด Ki-67 จึงเป็นตัววัดการแบ่งตัวของเซลล์ (proliferation) ดัชนี Ki-67 (เรียกอีกอย่างว่าดัชนีการติดฉลากหรือดัชนีการแบ่งตัว) คือสัดส่วนนั้นในรูปเปอร์เซ็นต์
ดัชนี Ki-67 (%) = นิวเคลียสเซลล์เนื้องอกที่ให้ผลบวก ÷ (นิวเคลียสเซลล์เนื้องอกที่ให้ผลบวก + ผลลบ) × 100
ตัวอย่างการคำนวณ: นิวเคลียสเซลล์เนื้องอกสีน้ำตาล (ผลบวก) 180 ตัวและสีน้ำเงิน (ผลลบ) 820 ตัว รวมเป็น 1,000 ตัว ดัชนีจึงเท่ากับ 180 ÷ 1,000 × 100 = 18 % การนับ 1,000 นิวเคลียสระบุค่านี้ได้ละเอียดที่สุดเพียงราว 15.7 % ถึง 20.5 % ส่วนค่า 18 % เดียวกันที่ได้จากการนับ 200 นิวเคลียสอาจอยู่ที่ใดก็ได้ระหว่างประมาณ 13 % ถึง 24 %
การติดสีในนิวเคลียสที่เข้มกว่าพื้นหลังมักนับเป็นผลบวกไม่ว่าจะเข้มเพียงใด และนับเฉพาะนิวเคลียสของเซลล์เนื้องอก ไม่นับลิมโฟไซต์ สโตรมา หรือเอนโดทีเลียม
นับตรงไหน: ทั้งชิ้นเนื้อหรือ hot spot
การย้อม Ki-67 แทบไม่เคยสม่ำเสมอ ตำแหน่งที่นับจึงเปลี่ยนผลลัพธ์ได้มากกว่าการคำนวณ ให้ใช้วิธีที่แนวทางสำหรับชนิดเนื้องอกของคุณกำหนด และระบุว่าใช้วิธีใด
- แบบ global (มะเร็งเต้านม): International Ki67 in Breast Cancer Working Group แนะนำวิธีประเมินด้วยตาแบบมาตรฐาน ซึ่งให้คะแนนขอบเขตภาพที่เป็นตัวแทนของช่วงการติดสีทั่วทั้งชิ้นเนื้อ และบันทึกเป็นคะแนน global แบบถ่วงน้ำหนัก แทนการใช้ hot spot อย่างเดียว ซึ่งแปรผันระหว่างผู้ประเมินมากกว่า
- Hot spot (เนื้องอกนิวโรเอนโดครีน): การให้เกรดอ่านดัชนีในบริเวณที่มีการติดฉลากสูงสุด โดยนับเซลล์เนื้องอกอย่างน้อย 500 เซลล์ในบริเวณนั้น และห้องปฏิบัติการจำนวนมากนับจากภาพที่พิมพ์ออกมาหรือภาพที่ถ่ายไว้แทนการกะด้วยตา
- การกะด้วยตาเป็นวิธีที่อ่อนที่สุด: การประมาณโดยไม่นับมีความแปรผันระหว่างผู้ประเมินมากที่สุด การนับบนภาพที่ถ่ายไว้ หรือนับด้วยการวิเคราะห์ภาพที่คุณตรวจสอบแล้ว ให้ผลที่ทำซ้ำได้ดีกว่า
สำหรับคณะทำงานเดียวกันนี้ ค่า 5 % หรือต่ำกว่าและ 30 % หรือสูงกว่าเป็นช่วงที่ Ki-67 ถูกพิจารณาว่าเชื่อถือได้เพียงพอที่จะใช้ประกอบการพยากรณ์โรคในมะเร็งเต้านมระยะเริ่มต้น ส่วนค่าระหว่างนั้นมีความสอดคล้องระหว่างห้องปฏิบัติการน้อยกว่า เกณฑ์ทางคลินิกเป็นของแนวทางสำหรับชนิดเนื้องอกนั้น ไม่ใช่ของหน้านี้
ควรนับนิวเคลียสกี่ตัว
การนับคือการสุ่มตัวอย่าง และความไม่แน่นอนจะลดลงตามรากที่สองของจำนวนที่นับ ช่วงที่เครื่องคำนวณแสดงคือช่วง Wilson สำหรับสัดส่วน สำหรับการวางแผน การประมาณด้วยการแจกแจงปกติแบบที่ใช้กันทั่วไปก็เพียงพอ: สำหรับดัชนีที่คาดไว้ p และส่วนเผื่อที่ต้องการ ± m (ทั้งคู่เป็นเศษส่วน) จำนวนนิวเคลียสที่ต้องใช้สำหรับช่วง 95 % มีค่าประมาณ:
n = 1.96² × p × (1 − p) ÷ m²
| ดัชนีที่คาดไว้ | ± 5 จุด | ± 3 จุด | ± 2 จุด |
|---|---|---|---|
| 5 % | 73 | 203 | 457 |
| 10 % | 139 | 385 | 865 |
| 20 % | 246 | 683 | 1,537 |
| 30 % | 323 | 897 | 2,017 |
| 50 % | 385 | 1,068 | 2,401 |
ค่านี้เป็นเพียงความคลาดเคลื่อนของการนับ ไม่ได้บอกอะไรเกี่ยวกับขอบเขตภาพที่คุณเลือก หรือจุดที่คุณใช้แบ่งระหว่างผลบวกและผลลบ วิธีที่กำหนดไว้ตายตัวจึงสำคัญกว่าการนับจำนวนมหาศาล
ให้ซอฟต์แวร์คำนวณคะแนนเดียวกัน
ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ภาพได้คะแนนเหล่านี้ด้วยการคำนวณแบบเดียวกัน เพียงแต่ใช้การวัดแทนสายตา ซอฟต์แวร์จะหานิวเคลียสทุกตัวในบริเวณ แยกสี DAB สีน้ำตาลออกจากฮีมาทอกซิลินสีน้ำเงินด้วย colour deconvolution วัดค่าเฉลี่ยความหนาแน่นเชิงแสงของ DAB ในนิวเคลียสแต่ละตัว และให้เกรดตามค่า threshold ที่คุณกำหนด: หนึ่งค่าสำหรับผลบวกหรือผลลบ และสามค่าสำหรับ 1+, 2+ และ 3+
- QuPath (ฟรี โอเพนซอร์ส): Positive cell detection ที่ใช้ threshold หนึ่งค่าให้เปอร์เซ็นต์ที่ให้ผลบวก และเมื่อใช้สามค่าจะรายงาน H-score ด้วย
- Fiji / ImageJ (ฟรี): Colour Deconvolution ด้วยเวกเตอร์ H DAB แล้วทำ threshold และนับ ส่วนการคำนวณคะแนนคุณต้องทำเอง
- SlideScope: นับนิวเคลียสในบริเวณที่คุณเลือก ให้เกรดแต่ละตัว และรายงานเปอร์เซ็นต์ที่ให้ผลบวก, H-score และคะแนน Allred พร้อมกัน โดยใช้นิยามเดียวกับ QuPath คุณยังถามด้วยภาษาทั่วไปผ่าน Ask Your Slide ได้ ทุกตัวเลขมาจากเครื่องมือบนเครื่อง พร้อมเส้นขอบให้ตรวจสอบ ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น
ไม่ว่าจะใช้เครื่องมือใด ค่า threshold คือสิ่งที่คุณเลือกเอง: บันทึกไว้ในส่วนวิธีการ ตรวจเส้นขอบเทียบกับภาพ และใช้ค่าเดิมกับทุกสไลด์ที่นำมาเปรียบเทียบ ดูทีละขั้นตอนได้ที่วิธีวัดปริมาณการย้อม IHC
คำถาม
จะคำนวณดัชนี Ki-67 ได้อย่างไร
หารจำนวนนิวเคลียสเซลล์เนื้องอกที่ให้ผลบวกต่อ Ki-67 ด้วยนิวเคลียสเซลล์เนื้องอกทั้งหมดที่นับ (ผลบวกรวมผลลบ) แล้วคูณด้วย 100 เมื่อมีผลบวก 180 จาก 1,000 นิวเคลียส ดัชนีคือ 18 %
ควรนับเซลล์กี่เซลล์สำหรับ Ki-67
ขึ้นกับแนวทางสำหรับชนิดเนื้องอกและความแม่นยำที่คุณต้องการ การให้เกรดเนื้องอกนิวโรเอนโดครีนนับเซลล์เนื้องอกอย่างน้อย 500 เซลล์ใน hot spot ในทางสถิติ นิวเคลียสประมาณ 700 ตัวให้ความแม่นยำ ± 3 จุดเปอร์เซ็นต์ที่ดัชนีราว 20 % และประมาณ 250 ตัวให้ ± 5
ควรนับ Ki-67 ใน hot spot หรือทั่วทั้งชิ้นเนื้อ
ให้ปฏิบัติตามแนวทางสำหรับชนิดเนื้องอกนั้น International Ki67 in Breast Cancer Working Group แนะนำคะแนน global แบบถ่วงน้ำหนักทั่วทั้งชิ้นเนื้อ ส่วนการให้เกรดเนื้องอกนิวโรเอนโดครีนใช้ hot spot และควรระบุเสมอว่าใช้วิธีใด
ดัชนี Ki-67 เท่าไรจึงถือว่าสูง
ไม่มีจุดตัดค่าเดียว ขึ้นกับชนิดเนื้องอกและแนวทาง ในมะเร็งเต้านมระยะเริ่มต้น International Ki67 Working Group พิจารณาว่าค่า 5 % หรือต่ำกว่าและ 30 % หรือสูงกว่าเชื่อถือได้เพียงพอที่จะใช้ประกอบการพยากรณ์โรค สำหรับผลของผู้ป่วย ให้สอบถามพยาธิแพทย์ผู้ออกรายงานหรือแพทย์ผู้รักษา
ซอฟต์แวร์นับ Ki-67 ได้หรือไม่
ได้ การวิเคราะห์ภาพตรวจหานิวเคลียสทุกตัวในบริเวณที่เลือก แล้วจำแนกเป็นผลบวกหรือผลลบตามการติดสี DAB ทั้ง QuPath และ SlideScope รายงานเปอร์เซ็นต์ที่ให้ผลบวกด้วยวิธีนี้ คณะทำงานระบุว่าการให้คะแนนอัตโนมัติยังอยู่ในขั้นศึกษาวิจัย (investigational) สำหรับการใช้ทางคลินิก จึงควรตรวจสอบเส้นขอบและค่า threshold และถือว่าผลลัพธ์มีไว้เพื่อการวิจัย
เครื่องคำนวณนี้ใช้ฟรีหรือไม่?
ฟรี เครื่องคำนวณทำงานในเบราว์เซอร์ของคุณและไม่ส่งข้อมูลไปที่ใดเลย SlideScope ซึ่งเป็นแอปเดสก์ท็อปสำหรับภาพกล้องจุลทรรศน์และพยาธิวิทยาจากทีมเดียวกัน เป็นแอปแบบชำระเงินที่มีคลังภาพตัวอย่างฟรี (ใช้ได้ทุกเครื่องมือ) และต้องสมัครสมาชิกสำหรับภาพของคุณเอง
แหล่งอ้างอิง
- Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
- Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (นับใน hot spot อย่างน้อย 500 เซลล์)
- เอกสาร QuPath: ดัชนีการติดฉลาก Ki67 ด้วย Positive cell detection
- NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1: ช่วงความเชื่อมั่นสำหรับสัดส่วน (วิธี Wilson)
เครื่องคำนวณเหล่านี้ทำการคำนวณเพื่อการวิจัยและการเรียนการสอน ไม่ใช่เครื่องมือวินิจฉัย การให้คะแนนเพื่อการดูแลผู้ป่วยต้องเป็นไปตามวิธีทดสอบที่ผ่านการตรวจสอบความถูกต้อง (validated) แนวทางปัจจุบันสำหรับมาร์กเกอร์นั้น และวิจารณญาณของพยาธิแพทย์
ให้คะแนนสไลด์แทนการนับด้วยมือ
SlideScope นับนิวเคลียสในบริเวณหนึ่งของสไลด์ ให้เกรดแต่ละตัวตามการติดสี DAB และรายงานเปอร์เซ็นต์ที่ให้ผลบวก, H-score และคะแนน Allred พร้อมเส้นขอบให้ตรวจสอบ บนคอมพิวเตอร์ของคุณเอง หรือพิมพ์คำถาม: Ask Your Slide จะรันเครื่องมือชุดเดียวกันและแสดงหลักฐาน ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น ลองใช้ทุกเครื่องมือฟรีกับภาพตัวอย่างในตัว การเปิดภาพของคุณเองต้องสมัครสมาชิก ตัดสินใจแล้วใช่ไหม สมัครสมาชิกเลย