Calculadora del índice Ki-67

Calculadora del índice Ki-67

Cómo se calcula el índice Ki-67

Ki-67 es una proteína nuclear presente en las células que están en el ciclo celular y ausente en las células en reposo, de modo que la proporción de núcleos tumorales que se tiñen para ella es una medida de la proliferación. El índice Ki-67 (también llamado índice de marcaje o índice de proliferación) es esa proporción expresada en porcentaje.

Índice Ki-67 (%) = núcleos tumorales positivos ÷ (núcleos tumorales positivos + negativos) × 100

Ejemplo resuelto: 180 núcleos tumorales marrones (positivos) y 820 azules (negativos) suman 1000 núcleos, así que el índice es 180 ÷ 1000 × 100 = 18 %. Un recuento de 1000 núcleos solo permite acotarlo a entre un 15,7 % y un 20,5 % aproximadamente; el mismo 18 % obtenido con 200 núcleos podría estar en cualquier punto entre un 13 % y un 24 % aproximadamente.

Cualquier tinción nuclear por encima del fondo suele contar como positiva, sea cual sea su intensidad; solo se cuentan los núcleos tumorales, no los linfocitos, el estroma ni el endotelio.

Dónde contar: sección completa o hot spot

La tinción de Ki-67 rara vez es homogénea, así que el lugar donde cuentas cambia el resultado más que la aritmética. Usa el método que indique la guía de tu tipo de tumor y especifica cuál has usado.

• Global (cáncer de mama): el International Ki67 in Breast Cancer Working Group recomienda un método visual estandarizado que puntúa campos representativos de todo el rango de tinción de la sección y registra una puntuación global ponderada, en lugar de solo el hot spot, que variaba más entre observadores.
• Hot spot (tumores neuroendocrinos): la gradación lee el índice en la zona de mayor marcaje, contando allí al menos 500 células tumorales, y muchos laboratorios cuentan sobre una imagen impresa o capturada en lugar de a ojo.
• La estimación a ojo es el método más débil: las estimaciones sin recuento son las que más varían entre observadores. Contar sobre una imagen capturada, o con un análisis de imagen que hayas verificado, es más reproducible.

Para ese mismo grupo de trabajo, los valores del 5 % o menos y del 30 % o más fueron los intervalos en los que Ki-67 se consideró lo bastante fiable para orientar el pronóstico en el cáncer de mama precoz; los valores intermedios concordaban peor entre laboratorios. Los umbrales clínicos corresponden a la guía del tipo de tumor, no a esta página.

Cuántos núcleos contar

Un recuento es una muestra, y su incertidumbre disminuye con la raíz cuadrada del número contado. El intervalo que muestra la calculadora es el intervalo de Wilson para una proporción. Para planificar basta la aproximación normal habitual: para un índice esperado p y un margen deseado de ± m (ambos como fracciones), los núcleos necesarios para un intervalo del 95 % son aproximadamente:

n = 1,96² × p × (1 − p) ÷ m²

Esto es solo el error de recuento. No dice nada sobre qué campos elegiste ni dónde trazaste la línea entre positivo y negativo, y por eso un método fijo importa más que un recuento muy grande.

Obtener la misma puntuación con software

El software de análisis de imagen llega a estas puntuaciones con la misma aritmética, pero sustituye el ojo por una medición. Detecta todos los núcleos de la región, separa la tinción marrón de DAB de la hematoxilina azul mediante deconvolución de color, mide la densidad óptica media de DAB de cada núcleo y lo gradúa según los umbrales que fijes: un umbral para positivo o negativo, y tres para 1+, 2+ y 3+.

• QuPath (gratuito, de código abierto): Positive cell detection con un umbral da el porcentaje de positivos; con tres umbrales, también indica el H-score.
• Fiji / ImageJ (gratuito): Colour Deconvolution con los vectores H DAB y, después, umbral y recuento; la aritmética de la puntuación corre de tu cuenta.
• SlideScope: cuenta los núcleos de la región que elijas, gradúa cada uno e indica a la vez el porcentaje de positivos, el H-score y la puntuación de Allred, con las mismas definiciones que QuPath. También puedes preguntar en lenguaje natural con Ask Your Slide; cada número procede de la herramienta local, con contornos para comprobarlo. Solo para uso en investigación.

Uses lo que uses, los umbrales son decisiones tuyas: anótalos en los métodos, comprueba los contornos con la imagen y mantenlos fijos en todos los portaobjetos que compares. Paso a paso: cómo cuantificar la tinción de IHQ.

Preguntas

Fuentes

• Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
• Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (recuento en hot spot de al menos 500 células)
• Documentación de QuPath: índice de marcaje Ki67 mediante la detección de células positivas
• NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1: intervalos de confianza para una proporción (el método de Wilson)

Estas calculadoras hacen cálculos para investigación y docencia. No son una herramienta diagnóstica: la puntuación para la atención al paciente sigue el ensayo validado, la guía vigente para ese marcador y el criterio de un patólogo.