تقييم IHC
حاسبة H-score
أدخل نسبة الخلايا المصبوغة عند كل شدة، أو عدد الخلايا التي عددتها، واحصل على H-score على مقياسه من 0 إلى 300 مع نسبة الخلايا الإيجابية. فيما يلي المعادلة، ومثال محلول، وما يمكن أن يخبرك به الرقم وما لا يمكنه، وكيف تصل برامج تحليل الصور إلى الدرجة نفسها.
كيف يُحسب H-score
يجمع H-score (أو histoscore) أمرين في رقم واحد: كم خلية مصبوغة، وبأي قوة. تُعطى كل خلية من المجموعة التي تقيّمها، وهي عادةً الخلايا الورمية، درجة 0 (سلبية) أو 1+ (ضعيفة) أو 2+ (متوسطة) أو 3+ (قوية). ثم تُضرب نسبة الخلايا عند كل درجة في تلك الدرجة، وتُجمع حواصل الضرب الثلاثة.
H-score = 1 × (% الخلايا 1+) + 2 × (% الخلايا 2+) + 3 × (% الخلايا 3+)
مثال محلول: 30 % من الخلايا مصبوغة بضعف، و20 % بشدة متوسطة، و10 % بقوة؛ والـ 40 % الباقية سلبية. H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100، مع 60 % من الخلايا إيجابية. ومن الأعداد يكون المجموع نفسه: من بين 400 خلية، تعطي 120 ضعيفة و80 متوسطة و40 قوية (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100.
قُدّمت هذه الدرجة لصبغ مستقبلات الإستروجين في ثمانينيات القرن العشرين، بوصفها تقييمًا “يجمع شدة الصبغ وتوزيعه معًا”، وتُستخدم اليوم لكثير من الواسمات النووية والسيتوبلازمية والغشائية.
ما يمكن أن يخبرك به الرقم وما لا يمكنه
- شرائح مختلفة، والدرجة نفسها: 100 % خلايا ضعيفة و33 % خلايا قوية تعطيان كلتاهما نحو 100. اذكر النسبة الإيجابية، أو النسبة عند كل شدة، بجانب H-score.
- لا توجد قيمة فاصلة عامة: الدرجة التي تُعدّ “مرتفعة” أو “إيجابية” تتوقف على الواسم والجسم المضاد والاختبار والدراسة. خذ العتبة من الورقة البحثية أو الإرشادات التي تتبعها، واذكرها.
- تقدير الشدة بالعين ذاتي: الحدّ الذي ينتهي عنده الضعيف ويبدأ المتوسط يختلف بين المراقبين. قيّم مقارنةً بشواهد صُبغت في الدفعة نفسها، واطلب من قارئ ثانٍ تقييم عيّنة من الشرائح.
- قيّم الخلايا الصحيحة: عُدّ فقط مجموعة الخلايا التي يُقرأ فيها الواسم، واستبعد السدى والخلايا اللمفاوية والنخر وتشوهات الحواف ما لم ينص بروتوكولك على غير ذلك.
- عُدّ عددًا كافيًا من الخلايا: الدرجة المحسوبة من بضع عشرات من الخلايا تتغير كثيرًا مع كل خلية. بضع مئات من الخلايا في حقول ممثِّلة حدٌّ أدنى شائع.
الحصول على الدرجة نفسها من البرامج
تصل برامج تحليل الصور إلى هذه الدرجات بالحساب نفسه، مع استبدال العين بالقياس. فهي تكشف كل نواة في المنطقة، وتفصل صبغة DAB البنية عن الهيماتوكسيلين الأزرق بفصل الألوان (colour deconvolution)، وتقيس متوسط الكثافة الضوئية لـ DAB في كل نواة، ثم تصنّفها وفق عتبات تحددها أنت: عتبة واحدة للإيجابي أو السلبي، وثلاث عتبات للدرجات 1+ و2+ و3+.
- QuPath (مجاني ومفتوح المصدر): تعطي Positive cell detection بعتبة واحدة نسبة الخلايا الإيجابية؛ وبثلاث عتبات تعطي H-score أيضًا.
- Fiji / ImageJ (مجاني): Colour Deconvolution بمتجهات H DAB، ثم العتبة والعدّ؛ أما حساب الدرجة فعليك أنت.
- SlideScope: يعدّ الأنوية في المنطقة التي تختارها، ويصنّف كلًّا منها، ويعطي النسبة الإيجابية وH-score ودرجة Allred معًا، بالتعريفات نفسها المستخدمة في QuPath. ويمكنك أيضًا السؤال بلغة بسيطة عبر Ask Your Slide؛ فكل رقم يأتي من الأداة المحلية، مع حدود يمكنك التحقق منها. للاستخدام البحثي فقط.
أيًّا كانت الأداة، فالعتبات خيارات: اكتبها في قسم الطرق، وطابق الحدود مع الصورة، وثبّتها في كل الشرائح التي تقارن بينها. خطوة بخطوة: كيفية القياس الكمي لصبغة IHC.
أسئلة
كيف تحسب H-score؟
اضرب نسبة الخلايا المصبوغة بضعف في 1، والمصبوغة بشدة متوسطة في 2، والمصبوغة بقوة في 3، ثم اجمع النواتج الثلاثة. مع 30 % ضعيفة و20 % متوسطة و10 % قوية يكون H-score هو 30 + 40 + 30 = 100.
ما نطاق H-score؟
من 0 إلى 300. الدرجة 0 تعني أنه لا توجد خلية مصبوغة؛ و300 تعني أن كل الخلايا مصبوغة بقوة (100 % × 3).
ما قيمة H-score التي تُعدّ إيجابية؟
لا توجد قيمة فاصلة عامة. تتوقف العتبة على الواسم، والجسم المضاد والاختبار، والدراسة أو الإرشادات التي تتبعها، لذا خذها من ذلك المصدر واذكرها مع نتيجتك.
ما الفرق بين H-score ودرجة Allred؟
كلاهما يجمع بين عدد الخلايا المصبوغة وقوة صبغها. يرجّح H-score النسبة عند كل شدة ويمتد من 0 إلى 300. أما درجة Allred فتضيف درجة النسبة (0 إلى 5) إلى درجة شدة واحدة تمثّل المعدّل (0 إلى 3)، وتمتد من 0 إلى 8.
هل يمكن للبرامج حساب H-score؟
نعم. يعطيه QuPath عندما تحدد ثلاث عتبات للشدة في Positive cell detection، ويعطي SlideScope النسبة الإيجابية وH-score ودرجة Allred لمنطقة ما بالتعريفات نفسها. كلاهما يصنّف كل نواة بحسب متوسط الكثافة الضوئية لـ DAB فيها، لذا فإن العتبات التي تختارها مكانها قسم الطرق.
هل هذه الحاسبة مجانية؟
نعم. تعمل في متصفحك ولا ترسل أي شيء إلى أي مكان. أما SlideScope، تطبيق المجهر وعلم الأمراض المكتبي من الفريق نفسه، فهو تطبيق مدفوع مع مكتبة عينات مجانية (بكل الأدوات) واشتراك لصورك الخاصة.
المصادر
- McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s (مقياس HSCORE)
- Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023 (المعادلة والنطاق من 0 إلى 300)
- توثيق QuPath: تصنيف الخلايا، وعتبات الشدة، وH-score
تجري هذه الحاسبات عمليات حسابية لأغراض البحث والتعليم. وهي ليست أداة تشخيصية: التقييم لرعاية المرضى يتبع الاختبار المُصادق عليه، والإرشادات الحالية لذلك الواسم، وحكم اختصاصي علم الأمراض.
قيّم الشريحة بدلًا من العدّ اليدوي
يعدّ SlideScope الأنوية في منطقة من شريحتك، ويصنّف كلًّا منها بحسب صبغة DAB، ويعطي النسبة الإيجابية وH-score ودرجة Allred مع الحدود للتحقق منها، على حاسوبك. أو اكتب السؤال: يشغّل Ask Your Slide الأدوات نفسها ويعرض الأدلة. للاستخدام البحثي فقط. جرّب كل الأدوات مجانًا على العينات المدمجة؛ أما فتح صورك الخاصة فيتطلب اشتراكًا. هل حسمت قرارك؟ اشترك الآن.