Calculadora do índice Ki-67

Calculadora do índice Ki-67

Como o índice Ki-67 é calculado

O Ki-67 é uma proteína nuclear presente nas células que estão no ciclo celular e ausente nas células em repouso, por isso a fração de núcleos tumorais que coram para ela é uma medida da proliferação. O índice Ki-67 (também chamado de índice de marcação ou índice de proliferação) é essa fração expressa em porcentagem.

Índice Ki-67 (%) = núcleos tumorais positivos ÷ (núcleos tumorais positivos + negativos) × 100

Exemplo resolvido: 180 núcleos tumorais marrons (positivos) e 820 azuis (negativos) somam 1.000 núcleos, então o índice é 180 ÷ 1.000 × 100 = 18 %. Uma contagem de 1.000 núcleos só consegue situá-lo entre cerca de 15,7 % e 20,5 %; os mesmos 18 % obtidos com 200 núcleos poderiam estar em qualquer ponto entre cerca de 13 % e 24 %.

Qualquer coloração nuclear acima do fundo costuma contar como positiva, qualquer que seja a intensidade; só os núcleos tumorais são contados, não linfócitos, estroma nem endotélio.

Onde contar: corte inteiro ou hot spot

A coloração de Ki-67 raramente é uniforme, então o local onde você conta muda a resposta mais do que a aritmética. Use o método indicado pela diretriz do seu tipo de tumor e informe qual usou.

• Global (câncer de mama): o International Ki67 in Breast Cancer Working Group recomenda um método visual padronizado que pontua campos representativos de toda a faixa de coloração do corte e registra um escore global ponderado, em vez de apenas o hot spot, que variava mais entre observadores.
• Hot spot (tumores neuroendócrinos): a graduação lê o índice na área de maior marcação, com pelo menos 500 células tumorais contadas ali, e muitos laboratórios contam a partir de uma imagem impressa ou capturada em vez de a olho.
• A estimativa a olho é o método mais fraco: estimativas sem contagem são as que mais variam entre observadores. Contar em uma imagem capturada, ou com uma análise de imagem que você conferiu, é mais reprodutível.

Para o mesmo grupo de trabalho, valores de 5 % ou menos e de 30 % ou mais foram as faixas em que o Ki-67 foi considerado confiável o suficiente para informar o prognóstico no câncer de mama inicial; os valores intermediários tiveram menor concordância entre laboratórios. Os limiares clínicos pertencem à diretriz do tipo de tumor, não a esta página.

Quantos núcleos contar

Uma contagem é uma amostra, e sua incerteza diminui com a raiz quadrada do número contado. O intervalo mostrado pela calculadora é o intervalo de Wilson para uma proporção. Para planejar, a aproximação normal usual basta: para um índice esperado p e uma margem desejada de ± m (ambos como frações), os núcleos necessários para um intervalo de 95 % são aproximadamente:

n = 1,96² × p × (1 − p) ÷ m²

Este é apenas o erro de contagem. Ele não diz nada sobre quais campos você escolheu nem sobre onde traçou a linha entre positivo e negativo, e é por isso que um método fixo importa mais do que uma contagem muito grande.

Obtendo o mesmo escore com software

O software de análise de imagem chega a esses escores pela mesma aritmética, trocando o olho por uma medição. Ele encontra todos os núcleos da região, separa a coloração marrom de DAB da hematoxilina azul por deconvolução de cor, mede a densidade óptica média de DAB de cada núcleo e o gradua segundo os limiares que você define: um limiar para positivo ou negativo, três para 1+, 2+ e 3+.

• QuPath (gratuito, de código aberto): a Positive cell detection com um limiar fornece a porcentagem de positivos; com três limiares, informa também o H-score.
• Fiji / ImageJ (gratuito): Colour Deconvolution com os vetores H DAB e, em seguida, limiar e contagem; a aritmética do escore fica por sua conta.
• SlideScope: conta os núcleos na região que você escolher, gradua cada um e informa juntos a porcentagem de positivos, o H-score e o escore de Allred, com as mesmas definições do QuPath. Você também pode perguntar em linguagem natural com o Ask Your Slide; cada número vem da ferramenta local, com contornos para conferir. Somente para uso em pesquisa.

Seja qual for a ferramenta, os limiares são escolhas suas: registre-os nos métodos, confira os contornos contra a imagem e mantenha-os fixos em todas as lâminas que você comparar. Passo a passo: como quantificar a coloração de IHQ.

Perguntas

Fontes

• Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
• Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (contagem no hot spot de pelo menos 500 células)
• Documentação do QuPath: índice de marcação Ki67 por detecção de células positivas
• NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1: intervalos de confiança para uma proporção (o método de Wilson)

Estas calculadoras fazem contas para pesquisa e ensino. Elas não são uma ferramenta diagnóstica: a pontuação para o cuidado do paciente segue o ensaio validado, a diretriz vigente para aquele marcador e o julgamento de um patologista.