Kalkulačka indexu Ki-67

Kalkulačka indexu Ki-67

Jak se index Ki-67 počítá

Ki-67 je jaderný protein přítomný v buňkách, které procházejí buněčným cyklem, a chybí v klidových buňkách, takže podíl jader nádorových buněk, která se na něj barví, je mírou proliferace. Index Ki-67 (nazývaný také index značení nebo proliferační index) je tento podíl vyjádřený v procentech.

Index Ki-67 (%) = pozitivní jádra nádorových buněk ÷ (pozitivní + negativní jádra nádorových buněk) × 100

Řešený příklad: 180 hnědých (pozitivních) a 820 modrých (negativních) jader nádorových buněk dává celkem 1 000 jader, takže index je 180 ÷ 1 000 × 100 = 18 %. Počet 1 000 jader dokáže hodnotu určit jen zhruba na 15,7 % až 20,5 %; stejných 18 % z 200 jader může ležet kdekoli zhruba mezi 13 % a 24 %.

Za pozitivní se obvykle považuje jakékoli jaderné barvení nad pozadím, bez ohledu na jeho sílu; počítají se jen jádra nádorových buněk, nikoli lymfocyty, stroma nebo endotel.

Kde počítat: celý řez, nebo hotspot

Barvení Ki-67 je zřídka rovnoměrné, takže místo počítání mění výsledek víc než samotný výpočet. Použijte metodu, kterou uvádí doporučení pro váš typ nádoru, a uveďte, kterou jste použili.

• Globální metoda (karcinom prsu): International Ki67 in Breast Cancer Working Group doporučuje standardizovanou vizuální metodu, která hodnotí pole reprezentující rozsah barvení napříč řezem a zaznamenává vážené globální skóre, místo samotného hotspotu, jehož hodnocení se mezi hodnotiteli lišilo více.
• Hotspot (neuroendokrinní nádory): grading odečítá index v oblasti s nejvyšším značením, kde se spočítá alespoň 500 nádorových buněk, a mnoho laboratoří počítá z vytištěného nebo zachyceného snímku, a ne okem.
• Odhad od oka je nejslabší metoda: odhady bez počítání se mezi hodnotiteli liší nejvíce. Počítání na zachyceném snímku nebo pomocí obrazové analýzy, kterou jste ověřili, je lépe opakovatelné.

Podle téže pracovní skupiny byly hodnoty 5 % a méně a 30 % a více rozmezí, v nichž byl Ki-67 považován za dostatečně spolehlivý pro odhad prognózy u časného karcinomu prsu; hodnoty mezi nimi se mezi laboratořemi shodovaly hůře. Klinické hranice patří do doporučení pro daný typ nádoru, ne na tuto stránku.

Kolik jader spočítat

Počet je výběrový vzorek a jeho nejistota klesá s druhou odmocninou počtu spočítaných jader. Interval, který kalkulačka ukazuje, je Wilsonův interval pro podíl. Pro plánování stačí obvyklá normální aproximace: pro očekávaný index p a požadovanou odchylku ± m (obojí jako podíl) je pro 95% interval potřeba přibližně tolik jader:

n = 1,96² × p × (1 − p) ÷ m²

Jde jen o chybu počítání. Neříká nic o tom, která pole jste zvolili ani kde jste vedli hranici mezi pozitivním a negativním, a proto na pevně dané metodě záleží víc než na velmi vysokém počtu.

Stejné skóre pomocí softwaru

Software pro analýzu obrazu dospívá k těmto skóre stejným výpočtem, jen oko nahrazuje měření. Najde každé jádro v oblasti, barevnou dekonvolucí oddělí hnědé barvivo DAB od modrého hematoxylinu, změří průměrnou optickou denzitu DAB každého jádra a ohodnotí ho podle prahů, které nastavíte: jeden práh pro pozitivní či negativní, tři pro 1+, 2+ a 3+.

• QuPath (zdarma, open source): Positive cell detection s jedním prahem dává procento pozitivních; se třemi prahy uvádí také H-score.
• Fiji / ImageJ (zdarma): Colour Deconvolution s vektory H DAB, pak prahování a počítání; výpočet skóre je na vás.
• SlideScope: spočítá jádra v oblasti, kterou zvolíte, každé ohodnotí a uvede procento pozitivních, H-score a skóre Allred najednou, podle stejných definic jako QuPath. Můžete se také zeptat běžným jazykem pomocí Ask Your Slide; každé číslo pochází z místního nástroje, s obrysy ke kontrole. Pouze pro výzkumné účely.

Ať použijete cokoli, prahy jsou vaše volba: zapište je do metod, porovnejte obrysy se snímkem a u preparátů, které srovnáváte, je ponechte stejné. Krok za krokem: jak kvantifikovat barvení IHC.

Otázky

Zdroje

• Nielsen TO et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: updated recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer Working Group. J Natl Cancer Inst 2021;113(7):808-819
• Trikalinos NA et al. Accuracy of grading in pancreatic neuroendocrine neoplasms and effect on survival estimates. Ann Surg Oncol 2020 (počítání v hotspotu nejméně 500 buněk)
• Dokumentace QuPath: index značení Ki67 pomocí Positive cell detection
• NIST/SEMATECH e-Handbook of Statistical Methods, 7.2.4.1: intervaly spolehlivosti pro podíl (Wilsonova metoda)

Tyto kalkulačky provádějí výpočty pro výzkum a výuku. Nejsou diagnostickým nástrojem: hodnocení pro péči o pacienty se řídí validovaným testem, aktuálním doporučením pro daný marker a úsudkem patologa.