المعايرة
حاسبة حجم البكسل في المجهر (ميكرومتر لكل بكسل)
اعرف كم ميكرومترًا يغطي البكسل الواحد في صورتك. بثلاث طرق: من الكاميرا والعدسة الشيئية، أو من مسافة مقيسة مثل ميكرومتر المنصة، أو لمستوى من هرم صورة الشريحة الكاملة. هذا الرقم هو ما يجعل شريط المقياس أو قياس الطول أو المساحة صحيحًا.
كيف يُحسب حجم البكسل عند العيّنة
حجم البكسل (µm/px) = بكسل الكاميرا (µm) × التجميع ÷ (العدسة الشيئية × محوّل الكاميرا)
يُسقَط بكسل الكاميرا نفسه (مثل 6.5 µm في كثير من كاميرات sCMOS، و3.45 µm في مستشعرات CMOS الشائعة) على العيّنة عبر العدسة الشيئية وأي محوّل للكاميرا. ويدمج التجميع 2 × 2 أربع بكسلات في بكسل واحد، فيتضاعف حجم البكسل. ولا دور للعدسة العينية في المجهر.
مثال محلول: بكسلات بحجم 6.5 µm، وعدسة شيئية 60×، ومحوّل 1×، دون تجميع: 6.5 ÷ 60 = 0.108 µm لكل بكسل، أي 9.2 بكسل لكل µm. قارن ذلك مع حجم البكسل وفق Nyquist لعدستك الشيئية لترى ما إذا كانت الكاميرا تأخذ عيّنات البصريات على نحو سليم.
المعايرة باستخدام ميكرومتر المنصة
تفترض المعادلة أن قيم التكبير الاسمية دقيقة تمامًا؛ وهي عادةً ضمن هامش بضعة في المئة. وللقياسات التي ستنشرها، عاير كل عدسة شيئية مرة واحدة: صوّر ميكرومتر المنصة (شريحة عليها مقياس مدرّج، غالبًا 1 mm مقسّم إلى 100 قسم كلٌّ منها 10 µm)، وارسم خطًا على امتداد أكبر عدد ممكن من الأقسام، ثم اقسم الطول الحقيقي على طول الخط بالبكسل.
مثال محلول: 100 µm من الميكرومتر تمتد على 400 بكسل: 100 ÷ 400 = 0.25 µm لكل بكسل. في Fiji يؤدي Analyze › Set Scale الوظيفة نفسها؛ وفي SlideScope يخزّن View › Set Pixel Size… القيمة لتلك الصورة عندما لا يحملها الملف.
الميكرون لكل بكسل (MPP) في صور الشرائح الكاملة
تسجّل ماسحات الشرائح حجم البكسل للمستوى الأساسي في الملف (يكتب Aperio SVS القيمة "MPP"، وتكتب الصيغ الأخرى وسمًا مكافئًا). ووفق العرف، يبلغ المسح بتكبير 40× نحو 0.25 µm لكل بكسل، والمسح بتكبير 20× نحو 0.5 µm لكل بكسل؛ وتعتمد القيمة الدقيقة على الماسح (شريحة الاختبار CMU-1 من OpenSlide، وهي مسح Aperio بتكبير 20×، تسجّل 0.499 µm/px). ويضرب كل مستوى في الهرم قيمة MPP في معامل تصغيره، لذا فإن المستوى 2 من شريحة 40× بمعامل تصغير 16 يساوي 4 µm لكل بكسل، أي ما يعادل نحو 2.5×.
اقرأها في Python باستخدام openslide.OpenSlide(path).properties["openslide.mpp-x"] (راجع قراءة ملفات SVS باستخدام Python). وتقرؤها العارضات المكتبية، ومنها SlideScope، تلقائيًا وترسم شريط المقياس بناءً عليها.
أسئلة
كيف تحسب الميكرون لكل بكسل؟
اقسم حجم بكسل الكاميرا على التكبير الكلي بين العيّنة والكاميرا (العدسة الشيئية × محوّل الكاميرا)، واضرب الناتج في التجميع. أو صوّر ميكرومتر المنصة واقسم طولًا معروفًا على طوله بالبكسل.
ما هو MPP في علم الأمراض؟
الميكرون لكل بكسل: عرض البكسل الواحد عند العيّنة في صورة الشريحة الكاملة. ووفق العرف، تُسمّى القيمة 0.25 µm/px تقريبًا 40×، والقيمة 0.5 µm/px تقريبًا 20×.
لماذا تعرض صورتي شريط مقياس خاطئًا؟
الملف يفتقد حجم البكسل أو يحمل قيمة خاطئة (بعض صادرات TIFF تخزّن 1 بكسل لكل بوصة). اضبط حجم البكسل بالمعايرة؛ في Fiji استخدم Analyze › Set Scale، وفي SlideScope استخدم View › Set Pixel Size….
هل تغيّر العدسة العينية حجم البكسل؟
لا. ترى الكاميرا الصورة التي تكوّنها العدسة الشيئية (والمحوّل)، لا عبر العدسة العينية.
هل هذه الحاسبة مجانية؟
نعم. تعمل في متصفحك ولا ترسل أي شيء إلى أي مكان. أما SlideScope، تطبيق المجهر المكتبي من الفريق نفسه، فهو تطبيق مدفوع مع مكتبة عينات مجانية (بكل الأدوات) واشتراك لصورك الخاصة.
المصادر
النتائج نظرية أو حسابية؛ قارنها بوثائق جهازك قبل الاعتماد عليها في العمل السريري أو الخاضع للتنظيم.
قِس على صورك الحقيقية
يفتح SlideScope 34 صيغة من صيغ المجاهر وماسحات الشرائح، منها CZI وND2 وSVS وLIF، مع المعايرة المسجلة في كل منها، فتظهر الأطوال والمساحات وأعداد الخلايا وأشرطة المقياس بوحدة µm دون أي إعداد. جرّب كل الأدوات مجانًا على العينات المدمجة؛ أما فتح صورك الخاصة فيتطلب اشتراكًا. هل حسمت قرارك؟ اشترك الآن.