Calculadora de H-score

Calculadora de H-score

Como o H-score é calculado

O H-score (histoscore) reúne duas coisas em um único número: quantas células estão coradas e com que intensidade. Cada célula da população que você está pontuando, geralmente as células tumorais, é graduada como 0 (negativa), 1+ (fraca), 2+ (moderada) ou 3+ (forte). A porcentagem de células em cada grau é multiplicada por esse grau e os três produtos são somados.

H-score = 1 × (% de células 1+) + 2 × (% de células 2+) + 3 × (% de células 3+)

Exemplo resolvido: 30 % das células coram fracamente, 20 % moderadamente e 10 % fortemente; os outros 40 % são negativos. H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100, com 60 % de células positivas. A partir de contagens, a soma é a mesma: de 400 células, 120 fracas, 80 moderadas e 40 fortes dão (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100.

O escore foi introduzido para a coloração do receptor de estrogênio na década de 1980, como uma avaliação que “incorporava tanto a intensidade quanto a distribuição da coloração”, e hoje é usado para muitos marcadores nucleares, citoplasmáticos e de membrana.

O que o número pode e não pode dizer

• Lâminas diferentes, mesmo escore: 100 % de células fracas e 33 % de células fortes dão, ambos, cerca de 100. Informe a porcentagem de positivos, ou a porcentagem em cada intensidade, ao lado do H-score.
• Não existe ponto de corte universal: o escore considerado “alto” ou “positivo” depende do marcador, do anticorpo, do ensaio e do estudo. Tire o limiar do artigo ou da diretriz que você segue e declare-o.
• A intensidade avaliada a olho é subjetiva: onde termina a fraca e começa a moderada varia entre observadores. Pontue em comparação com controles corados na mesma rodada e peça a um segundo leitor que pontue uma amostra das lâminas.
• Pontue as células certas: conte apenas a população celular em que o marcador é lido e deixe de fora estroma, linfócitos, necrose e artefatos de borda, a menos que o seu protocolo diga o contrário.
• Conte células suficientes: um escore obtido de poucas dezenas de células muda muito a cada célula. Várias centenas de células em campos representativos é um mínimo comum.

Obtendo o mesmo escore com software

O software de análise de imagem chega a esses escores pela mesma aritmética, trocando o olho por uma medição. Ele encontra todos os núcleos da região, separa a coloração marrom de DAB da hematoxilina azul por deconvolução de cor, mede a densidade óptica média de DAB de cada núcleo e o gradua segundo os limiares que você define: um limiar para positivo ou negativo, três para 1+, 2+ e 3+.

• QuPath (gratuito, de código aberto): a Positive cell detection com um limiar fornece a porcentagem de positivos; com três limiares, informa também o H-score.
• Fiji / ImageJ (gratuito): Colour Deconvolution com os vetores H DAB e, em seguida, limiar e contagem; a aritmética do escore fica por sua conta.
• SlideScope: conta os núcleos na região que você escolher, gradua cada um e informa juntos a porcentagem de positivos, o H-score e o escore de Allred, com as mesmas definições do QuPath. Você também pode perguntar em linguagem natural com o Ask Your Slide; cada número vem da ferramenta local, com contornos para conferir. Somente para uso em pesquisa.

Seja qual for a ferramenta, os limiares são escolhas suas: registre-os nos métodos, confira os contornos contra a imagem e mantenha-os fixos em todas as lâminas que você comparar. Passo a passo: como quantificar a coloração de IHQ.

Perguntas

Fontes

• McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s (o HSCORE)
• Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023 (fórmula e faixa de 0 a 300)
• Documentação do QuPath: classificação celular, limiares de intensidade e H-score

Estas calculadoras fazem contas para pesquisa e ensino. Elas não são uma ferramenta diagnóstica: a pontuação para o cuidado do paciente segue o ensaio validado, a diretriz vigente para aquele marcador e o julgamento de um patologista.