Calculadora de H-score

Calculadora de H-score

Como se calcula o H-score

O H-score (histoscore) reúne duas coisas num único número: quantas células estão coradas e com que intensidade. Cada célula da população que está a pontuar, normalmente as células tumorais, é graduada como 0 (negativa), 1+ (fraca), 2+ (moderada) ou 3+ (forte). A percentagem de células em cada grau é multiplicada por esse grau e os três produtos são somados.

H-score = 1 × (% de células 1+) + 2 × (% de células 2+) + 3 × (% de células 3+)

Exemplo resolvido: 30 % das células coram fracamente, 20 % moderadamente e 10 % fortemente; os restantes 40 % são negativos. H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100, com 60 % de células positivas. A partir de contagens, a soma é a mesma: em 400 células, 120 fracas, 80 moderadas e 40 fortes dão (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100.

A pontuação foi introduzida para a coloração do recetor de estrogénio na década de 1980, como uma avaliação que «incorporava tanto a intensidade como a distribuição da coloração», e é hoje usada para muitos marcadores nucleares, citoplasmáticos e de membrana.

O que o número pode e não pode dizer

• Lâminas diferentes, a mesma pontuação: 100 % de células fracas e 33 % de células fortes dão ambas cerca de 100. Indique a percentagem de positivos, ou a percentagem em cada intensidade, ao lado do H-score.
• Não há um ponto de corte universal: a pontuação considerada «alta» ou «positiva» depende do marcador, do anticorpo, do ensaio e do estudo. Retire o limiar do artigo ou da orientação que segue e declare-o.
• A intensidade avaliada a olho é subjetiva: onde termina a fraca e começa a moderada varia entre observadores. Pontue por comparação com controlos corados na mesma série e peça a um segundo leitor que pontue uma amostra das lâminas.
• Pontue as células certas: conte apenas a população celular em que o marcador é lido e exclua estroma, linfócitos, necrose e artefactos de bordo, salvo indicação em contrário do seu protocolo.
• Conte células suficientes: uma pontuação obtida com poucas dezenas de células varia muito a cada célula. Várias centenas de células em campos representativos é um mínimo habitual.

Obter a mesma pontuação com software

O software de análise de imagem chega a estas pontuações com a mesma aritmética, substituindo o olho por uma medição. Encontra todos os núcleos da região, separa a coloração castanha de DAB da hematoxilina azul por desconvolução de cor, mede a densidade ótica média de DAB de cada núcleo e gradua-o segundo os limiares que definir: um limiar para positivo ou negativo, três para 1+, 2+ e 3+.

• QuPath (gratuito, de código aberto): a Positive cell detection com um limiar dá a percentagem de positivos; com três limiares, indica também o H-score.
• Fiji / ImageJ (gratuito): Colour Deconvolution com os vetores H DAB e, depois, limiar e contagem; a aritmética da pontuação fica a seu cargo.
• SlideScope: conta os núcleos na região que escolher, gradua cada um e indica em conjunto a percentagem de positivos, o H-score e a pontuação de Allred, com as mesmas definições do QuPath. Também pode perguntar em linguagem corrente com o Ask Your Slide; cada número provém da ferramenta local, com contornos para verificar. Apenas para uso em investigação.

Seja qual for a ferramenta, os limiares são escolhas suas: registe-os nos métodos, compare os contornos com a imagem e mantenha-os fixos em todas as lâminas que comparar. Passo a passo: como quantificar a coloração de IHQ.

Perguntas

Fontes

• McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s (o HSCORE)
• Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023 (fórmula e intervalo de 0 a 300)
• Documentação do QuPath: classificação celular, limiares de intensidade e H-score

Estas calculadoras fazem contas para investigação e ensino. Não são uma ferramenta de diagnóstico: a pontuação para cuidados ao doente segue o ensaio validado, a orientação em vigor para esse marcador e o critério de um patologista.