การให้คะแนน IHC
เครื่องคำนวณ H-score
กรอกเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่ติดสีในแต่ละระดับความเข้ม หรือจำนวนเซลล์ที่คุณนับได้ แล้วรับค่า H-score บนสเกล 0 ถึง 300 พร้อมเปอร์เซ็นต์ที่ให้ผลบวก ด้านล่างมีสูตร ตัวอย่างการคำนวณ สิ่งที่ตัวเลขนี้บอกได้และบอกไม่ได้ และวิธีที่ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ภาพคำนวณได้คะแนนเดียวกัน
H-score คำนวณอย่างไร
H-score (histoscore) รวมสองสิ่งไว้ในตัวเลขเดียว คือมีเซลล์ติดสีมากเพียงใดและติดสีเข้มเพียงใด เซลล์แต่ละเซลล์ในกลุ่มที่คุณให้คะแนน ซึ่งมักเป็นเซลล์เนื้องอก จะได้รับเกรด 0 (ผลลบ), 1+ (อ่อน), 2+ (ปานกลาง) หรือ 3+ (เข้ม) จากนั้นนำเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ในแต่ละเกรดคูณด้วยเกรดนั้น แล้วรวมผลคูณทั้งสาม
H-score = 1 × (% เซลล์ 1+) + 2 × (% เซลล์ 2+) + 3 × (% เซลล์ 3+)
ตัวอย่างการคำนวณ: เซลล์ 30 % ติดสีอ่อน 20 % ติดสีปานกลาง และ 10 % ติดสีเข้ม ส่วนอีก 40 % ให้ผลลบ H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100 โดยมีเซลล์ที่ให้ผลบวก 60 % หากคำนวณจากจำนวนนับก็ได้ผลรวมเดียวกัน: จากเซลล์ 400 เซลล์ ติดสีอ่อน 120 ปานกลาง 80 และเข้ม 40 เซลล์ ได้ (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100
คะแนนนี้เริ่มใช้กับการย้อมตัวรับเอสโตรเจนในทศวรรษ 1980 ในฐานะการประเมินที่ “รวมทั้งความเข้มและการกระจายของการย้อม” และปัจจุบันใช้กับมาร์กเกอร์ในนิวเคลียส ไซโทพลาซึม และเยื่อหุ้มเซลล์จำนวนมาก
สิ่งที่ตัวเลขนี้บอกได้และบอกไม่ได้
- สไลด์ต่างกัน คะแนนเท่ากัน: เซลล์ติดสีอ่อน 100 % และเซลล์ติดสีเข้ม 33 % ต่างให้ค่าประมาณ 100 ให้รายงานเปอร์เซ็นต์ที่ให้ผลบวก หรือเปอร์เซ็นต์ในแต่ละระดับความเข้ม ควบคู่กับ H-score
- ไม่มีจุดตัดสากล: คะแนนที่ถือว่า “สูง” หรือ “ให้ผลบวก” ขึ้นกับมาร์กเกอร์ แอนติบอดี วิธีทดสอบ (assay) และการศึกษา ให้ใช้ค่า threshold จากบทความหรือแนวทางที่คุณอ้างอิง และระบุค่านั้นไว้
- การประเมินความเข้มด้วยตาเป็นเรื่องอัตวิสัย: จุดที่ระดับอ่อนสิ้นสุดและระดับปานกลางเริ่มต้นแตกต่างกันไปตามผู้ประเมิน ให้คะแนนโดยเทียบกับตัวควบคุมที่ย้อมในรอบเดียวกัน และให้ผู้ประเมินคนที่สองให้คะแนนสไลด์บางส่วนด้วย
- ให้คะแนนเซลล์ให้ถูกกลุ่ม: นับเฉพาะกลุ่มเซลล์ที่ใช้อ่านมาร์กเกอร์นั้น และตัดสโตรมา ลิมโฟไซต์ เนื้อตาย และสิ่งแปลกปลอมบริเวณขอบออก เว้นแต่โปรโตคอลของคุณจะกำหนดไว้เป็นอย่างอื่น
- นับเซลล์ให้มากพอ: คะแนนที่ได้จากเซลล์เพียงไม่กี่สิบเซลล์จะเปลี่ยนไปมากทุกครั้งที่เพิ่มหรือลดเซลล์หนึ่งเซลล์ ขั้นต่ำที่ใช้กันทั่วไปคือหลายร้อยเซลล์จากขอบเขตภาพที่เป็นตัวแทน
ให้ซอฟต์แวร์คำนวณคะแนนเดียวกัน
ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ภาพได้คะแนนเหล่านี้ด้วยการคำนวณแบบเดียวกัน เพียงแต่ใช้การวัดแทนสายตา ซอฟต์แวร์จะหานิวเคลียสทุกตัวในบริเวณ แยกสี DAB สีน้ำตาลออกจากฮีมาทอกซิลินสีน้ำเงินด้วย colour deconvolution วัดค่าเฉลี่ยความหนาแน่นเชิงแสงของ DAB ในนิวเคลียสแต่ละตัว และให้เกรดตามค่า threshold ที่คุณกำหนด: หนึ่งค่าสำหรับผลบวกหรือผลลบ และสามค่าสำหรับ 1+, 2+ และ 3+
- QuPath (ฟรี โอเพนซอร์ส): Positive cell detection ที่ใช้ threshold หนึ่งค่าให้เปอร์เซ็นต์ที่ให้ผลบวก และเมื่อใช้สามค่าจะรายงาน H-score ด้วย
- Fiji / ImageJ (ฟรี): Colour Deconvolution ด้วยเวกเตอร์ H DAB แล้วทำ threshold และนับ ส่วนการคำนวณคะแนนคุณต้องทำเอง
- SlideScope: นับนิวเคลียสในบริเวณที่คุณเลือก ให้เกรดแต่ละตัว และรายงานเปอร์เซ็นต์ที่ให้ผลบวก, H-score และคะแนน Allred พร้อมกัน โดยใช้นิยามเดียวกับ QuPath คุณยังถามด้วยภาษาทั่วไปผ่าน Ask Your Slide ได้ ทุกตัวเลขมาจากเครื่องมือบนเครื่อง พร้อมเส้นขอบให้ตรวจสอบ ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น
ไม่ว่าจะใช้เครื่องมือใด ค่า threshold คือสิ่งที่คุณเลือกเอง: บันทึกไว้ในส่วนวิธีการ ตรวจเส้นขอบเทียบกับภาพ และใช้ค่าเดิมกับทุกสไลด์ที่นำมาเปรียบเทียบ ดูทีละขั้นตอนได้ที่วิธีวัดปริมาณการย้อม IHC
คำถาม
จะคำนวณ H-score ได้อย่างไร
คูณเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่ติดสีอ่อนด้วย 1 เซลล์ที่ติดสีปานกลางด้วย 2 และเซลล์ที่ติดสีเข้มด้วย 3 แล้วรวมทั้งสามค่า เมื่อมีอ่อน 30 % ปานกลาง 20 % และเข้ม 10 % H-score คือ 30 + 40 + 30 = 100
H-score มีช่วงค่าเท่าไร
0 ถึง 300 คะแนน 0 หมายถึงไม่มีเซลล์ใดติดสี ส่วน 300 หมายถึงทุกเซลล์ติดสีเข้ม (100 % × 3)
H-score เท่าไรจึงถือว่าให้ผลบวก
ไม่มีจุดตัดสากล ค่า threshold ขึ้นกับมาร์กเกอร์ แอนติบอดีและวิธีทดสอบ รวมถึงการศึกษาหรือแนวทางที่คุณอ้างอิง จึงควรใช้ค่าจากแหล่งนั้นและรายงานไว้พร้อมผลของคุณ
H-score กับคะแนน Allred ต่างกันอย่างไร
ทั้งสองแบบรวมจำนวนเซลล์ที่ติดสีเข้ากับความเข้มของการติดสี H-score ถ่วงน้ำหนักเปอร์เซ็นต์ในแต่ละระดับความเข้มและมีค่าตั้งแต่ 0 ถึง 300 ส่วนคะแนน Allred นำคะแนนสัดส่วน (0 ถึง 5) บวกกับคะแนนความเข้มเฉลี่ยค่าเดียว (0 ถึง 3) และมีค่าตั้งแต่ 0 ถึง 8
ซอฟต์แวร์คำนวณ H-score ได้หรือไม่
ได้ QuPath รายงานค่านี้เมื่อคุณตั้งค่า threshold ความเข้มสามค่าใน Positive cell detection และ SlideScope รายงานเปอร์เซ็นต์ที่ให้ผลบวก, H-score และคะแนน Allred ของบริเวณที่เลือกโดยใช้นิยามเดียวกัน ทั้งสองโปรแกรมให้เกรดนิวเคลียสแต่ละตัวตามค่าเฉลี่ยความหนาแน่นเชิงแสงของ DAB ดังนั้นค่า threshold ที่คุณเลือกจึงควรระบุไว้ในส่วนวิธีการ
เครื่องคำนวณนี้ใช้ฟรีหรือไม่?
ฟรี เครื่องคำนวณทำงานในเบราว์เซอร์ของคุณและไม่ส่งข้อมูลไปที่ใดเลย SlideScope ซึ่งเป็นแอปเดสก์ท็อปสำหรับภาพกล้องจุลทรรศน์และพยาธิวิทยาจากทีมเดียวกัน เป็นแอปแบบชำระเงินที่มีคลังภาพตัวอย่างฟรี (ใช้ได้ทุกเครื่องมือ) และต้องสมัครสมาชิกสำหรับภาพของคุณเอง
แหล่งอ้างอิง
- McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s (ที่มาของ HSCORE)
- Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023 (สูตรและช่วง 0 ถึง 300)
- เอกสาร QuPath: การจำแนกเซลล์ ค่า threshold ความเข้ม และ H-score
เครื่องคำนวณเหล่านี้ทำการคำนวณเพื่อการวิจัยและการเรียนการสอน ไม่ใช่เครื่องมือวินิจฉัย การให้คะแนนเพื่อการดูแลผู้ป่วยต้องเป็นไปตามวิธีทดสอบที่ผ่านการตรวจสอบความถูกต้อง (validated) แนวทางปัจจุบันสำหรับมาร์กเกอร์นั้น และวิจารณญาณของพยาธิแพทย์
ให้คะแนนสไลด์แทนการนับด้วยมือ
SlideScope นับนิวเคลียสในบริเวณหนึ่งของสไลด์ ให้เกรดแต่ละตัวตามการติดสี DAB และรายงานเปอร์เซ็นต์ที่ให้ผลบวก, H-score และคะแนน Allred พร้อมเส้นขอบให้ตรวจสอบ บนคอมพิวเตอร์ของคุณเอง หรือพิมพ์คำถาม: Ask Your Slide จะรันเครื่องมือชุดเดียวกันและแสดงหลักฐาน ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น ลองใช้ทุกเครื่องมือฟรีกับภาพตัวอย่างในตัว การเปิดภาพของคุณเองต้องสมัครสมาชิก ตัดสินใจแล้วใช่ไหม สมัครสมาชิกเลย