Калькулятор H-score

Калькулятор H-score

Як розраховується H-score

H-score (гістоскор) поєднує в одному числі дві речі: скільки клітин забарвлено і наскільки інтенсивно. Кожній клітині оцінюваної популяції, зазвичай пухлинним клітинам, присвоюють ступінь 0 (негативна), 1+ (слабке забарвлення), 2+ (помірне) або 3+ (сильне). Відсоток клітин кожного ступеня множать на цей ступінь, а три добутки додають.

H-score = 1 × (% клітин 1+) + 2 × (% клітин 2+) + 3 × (% клітин 3+)

Розібраний приклад: 30 % клітин забарвлені слабко, 20 % — помірно і 10 % — сильно; решта 40 % негативні. H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100, позитивних клітин 60 %. За кількістю клітин сума та сама: із 400 клітин 120 слабких, 80 помірних і 40 сильних дають (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100.

Бал запропонували для забарвлення рецептора естрогену в 1980-х роках як оцінку, що «враховувала і інтенсивність, і розподіл забарвлення», а нині його застосовують до багатьох ядерних, цитоплазматичних і мембранних маркерів.

Що це число може і чого не може сказати

• Різні слайди, однаковий бал: 100 % слабко забарвлених клітин і 33 % сильно забарвлених дають приблизно 100. Зазначайте поруч із H-score відсоток позитивних клітин або відсоток клітин кожної інтенсивності.
• Універсального порогу немає: який бал вважати «високим» або «позитивним», залежить від маркера, антитіла, методики та дослідження. Беріть поріг зі статті або настанови, якої дотримуєтеся, і зазначайте його.
• Інтенсивність на око суб’єктивна: де закінчується слабке забарвлення і починається помірне, різні спостерігачі визначають по-різному. Оцінюйте відносно контролів, забарвлених у тій самій серії, і попросіть другого спостерігача оцінити частину слайдів.
• Оцінюйте потрібні клітини: рахуйте лише ту популяцію клітин, у якій читається маркер, і виключайте строму, лімфоцити, некроз і крайові артефакти, якщо ваш протокол не передбачає іншого.
• Рахуйте достатньо клітин: бал за кількома десятками клітин сильно змінюється з кожною клітиною. Звичайний мінімум — кілька сотень клітин у репрезентативних полях.

Як отримати той самий бал за допомогою програми

Програми аналізу зображень доходять до цих балів тією самою арифметикою, лише замість ока працює вимірювання. Програма знаходить кожне ядро в ділянці, відокремлює коричневий барвник DAB від синього гематоксиліну методом колірної деконволюції, вимірює середню оптичну густину DAB у кожному ядрі й відносить ядро до класу за заданими вами порогами: один поріг ділить ядра на позитивні й негативні, три пороги — на 1+, 2+ і 3+.

• QuPath (безкоштовна програма з відкритим кодом): Positive cell detection з одним порогом дає відсоток позитивних клітин, а з трьома порогами повідомляє також H-score.
• Fiji / ImageJ (безкоштовно): Colour Deconvolution з векторами H DAB, потім поріг і підрахунок; арифметику оцінки ви виконуєте самі.
• SlideScope: рахує ядра в обраній вами ділянці, відносить кожне до ступеня забарвлення й повідомляє відсоток позитивних клітин, H-score і бал Allred разом, за тими самими визначеннями, що й QuPath. Можна також запитати звичайними словами за допомогою Ask Your Slide; кожне число отримано локальним інструментом і супроводжується контурами для перевірки. Лише для дослідницьких цілей.

Хоч би який інструмент ви обрали, пороги — це ваш вибір: зазначте їх у розділі методів, звірте контури із зображенням і не змінюйте пороги між слайдами, які порівнюєте. Покроково: як кількісно оцінити ІГХ-забарвлення.

Запитання

Джерела

• McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s (першоопис HSCORE)
• Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023 (формула й діапазон від 0 до 300)
• Документація QuPath: класифікація клітин, пороги інтенсивності та H-score

Ці калькулятори виконують арифметичні розрахунки для досліджень і навчання. Вони не є діагностичним інструментом: оцінка для лікування пацієнтів ґрунтується на валідованому тесті, чинних рекомендаціях для цього маркера та судженні патолога.