Калькулятор H-score

Калькулятор H-score

Как рассчитывается H-score

H-score (гистоскор) объединяет в одном числе две вещи: сколько клеток окрашено и насколько интенсивно. Каждой клетке оцениваемой популяции, обычно опухолевым клеткам, присваивается степень 0 (отрицательная), 1+ (слабое окрашивание), 2+ (умеренное) или 3+ (сильное). Процент клеток каждой степени умножается на эту степень, и три произведения складываются.

H-score = 1 × (% клеток 1+) + 2 × (% клеток 2+) + 3 × (% клеток 3+)

Разобранный пример: 30 % клеток окрашены слабо, 20 % — умеренно и 10 % — сильно; остальные 40 % отрицательны. H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100, положительных клеток 60 %. По числу клеток сумма та же: из 400 клеток 120 слабых, 80 умеренных и 40 сильных дают (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100.

Балл был предложен для окрашивания рецептора эстрогена в 1980-х годах как оценка, которая «учитывала и интенсивность, и распределение окрашивания», а сейчас применяется ко многим ядерным, цитоплазматическим и мембранным маркерам.

Что это число может и чего не может сказать

• Разные слайды, одинаковый балл: 100 % слабо окрашенных клеток и 33 % сильно окрашенных дают примерно 100. Указывайте рядом с H-score процент положительных клеток или процент клеток каждой интенсивности.
• Универсального порога нет: какой балл считать «высоким» или «положительным», зависит от маркера, антитела, методики и исследования. Берите порог из статьи или руководства, которому следуете, и указывайте его.
• Интенсивность на глаз субъективна: где кончается слабое окрашивание и начинается умеренное, разные наблюдатели решают по-разному. Оценивайте относительно контролей, окрашенных в той же серии, и попросите второго наблюдателя оценить часть слайдов.
• Оценивайте нужные клетки: считайте только ту популяцию клеток, в которой читается маркер, и исключайте строму, лимфоциты, некроз и краевые артефакты, если ваш протокол не предписывает иное.
• Подсчитывайте достаточно клеток: балл по нескольким десяткам клеток сильно меняется с каждой клеткой. Обычный минимум — несколько сотен клеток в репрезентативных полях.

Как получить тот же балл с помощью программы

Программы анализа изображений приходят к этим баллам с помощью той же арифметики, только вместо глаза работает измерение. Программа находит каждое ядро в области, отделяет коричневый краситель DAB от синего гематоксилина методом цветовой деконволюции, измеряет среднюю оптическую плотность DAB в каждом ядре и относит ядро к классу по заданным вами порогам: один порог делит ядра на положительные и отрицательные, три порога — на 1+, 2+ и 3+.

• QuPath (бесплатная программа с открытым исходным кодом): Positive cell detection с одним порогом даёт процент положительных клеток, а с тремя порогами сообщает и H-score.
• Fiji / ImageJ (бесплатно): Colour Deconvolution с векторами H DAB, затем порог и подсчёт; арифметику оценки вы выполняете сами.
• SlideScope: подсчитывает ядра в выбранной вами области, относит каждое к степени окрашивания и сообщает процент положительных клеток, H-score и балл Allred вместе, по тем же определениям, что и QuPath. Можно также спросить обычными словами с помощью Ask Your Slide; каждое число получено локальным инструментом и сопровождается контурами для проверки. Только для исследовательских целей.

Какой бы инструмент вы ни выбрали, пороги — это ваш выбор: укажите их в разделе методов, сверьте контуры с изображением и не меняйте пороги между слайдами, которые сравниваете. Пошагово: как количественно оценить ИГХ-окрашивание.

Вопросы

Источники

• McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s (исходное описание HSCORE)
• Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023 (формула и диапазон от 0 до 300)
• Документация QuPath: классификация клеток, пороги интенсивности и H-score

Эти калькуляторы выполняют арифметические расчёты для исследований и обучения. Они не являются диагностическим инструментом: оценка для лечения пациентов основывается на валидированном тесте, действующих рекомендациях для данного маркера и суждении патолога.