Kalkulačka H-score

Kalkulačka H-score

Jak se H-score počítá

H-score (histoskóre) spojuje do jednoho čísla dvě věci: kolik buněk je obarveno a jak silně. Každá buňka hodnocené populace, obvykle nádorové buňky, dostane stupeň 0 (negativní), 1+ (slabé), 2+ (střední) nebo 3+ (silné). Procento buněk v každém stupni se vynásobí tímto stupněm a tři součiny se sečtou.

H-score = 1 × (% buněk 1+) + 2 × (% buněk 2+) + 3 × (% buněk 3+)

Řešený příklad: 30 % buněk se barví slabě, 20 % středně a 10 % silně; zbylých 40 % je negativních. H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100, přičemž pozitivních je 60 % buněk. Z počtů jde o stejný součet: ze 400 buněk dává 120 slabých, 80 středních a 40 silných (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100.

Skóre bylo zavedeno v 80. letech 20. století pro barvení estrogenového receptoru jako hodnocení, které „zahrnovalo intenzitu i distribuci barvení“, a dnes se používá pro mnoho jaderných, cytoplazmatických i membránových markerů.

Co číslo může a nemůže říct

• Různé preparáty, stejné skóre: 100 % slabě obarvených buněk i 33 % silně obarvených buněk dají přibližně 100. Vedle H-score proto uvádějte procento pozitivních buněk nebo procento při každé intenzitě.
• Žádná univerzální hranice: skóre, které se považuje za „vysoké“ nebo „pozitivní“, závisí na markeru, protilátce, testu a studii. Hranici převezměte z článku nebo doporučení, kterým se řídíte, a uveďte ji.
• Hodnocení intenzity okem je subjektivní: kde končí slabé a začíná střední barvení, se mezi hodnotiteli liší. Hodnoťte proti kontrolám obarveným ve stejné sérii a část preparátů nechte ohodnotit druhého hodnotitele.
• Hodnoťte správné buňky: počítejte jen populaci buněk, v níž se marker odečítá, a vynechte stroma, lymfocyty, nekrózu a artefakty na okrajích, pokud váš protokol neurčuje jinak.
• Napočítejte dost buněk: skóre z několika desítek buněk se s každou buňkou výrazně mění. Běžným minimem je několik set buněk z reprezentativních polí.

Stejné skóre pomocí softwaru

Software pro analýzu obrazu dospívá k těmto skóre stejným výpočtem, jen oko nahrazuje měření. Najde každé jádro v oblasti, barevnou dekonvolucí oddělí hnědé barvivo DAB od modrého hematoxylinu, změří průměrnou optickou denzitu DAB každého jádra a ohodnotí ho podle prahů, které nastavíte: jeden práh pro pozitivní či negativní, tři pro 1+, 2+ a 3+.

• QuPath (zdarma, open source): Positive cell detection s jedním prahem dává procento pozitivních; se třemi prahy uvádí také H-score.
• Fiji / ImageJ (zdarma): Colour Deconvolution s vektory H DAB, pak prahování a počítání; výpočet skóre je na vás.
• SlideScope: spočítá jádra v oblasti, kterou zvolíte, každé ohodnotí a uvede procento pozitivních, H-score a skóre Allred najednou, podle stejných definic jako QuPath. Můžete se také zeptat běžným jazykem pomocí Ask Your Slide; každé číslo pochází z místního nástroje, s obrysy ke kontrole. Pouze pro výzkumné účely.

Ať použijete cokoli, prahy jsou vaše volba: zapište je do metod, porovnejte obrysy se snímkem a u preparátů, které srovnáváte, je ponechte stejné. Krok za krokem: jak kvantifikovat barvení IHC.

Otázky

Zdroje

• McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s (zavedení HSCORE)
• Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023 (vzorec a rozsah 0 až 300)
• Dokumentace QuPath: klasifikace buněk, prahy intenzity a H-score

Tyto kalkulačky provádějí výpočty pro výzkum a výuku. Nejsou diagnostickým nástrojem: hodnocení pro péči o pacienty se řídí validovaným testem, aktuálním doporučením pro daný marker a úsudkem patologa.