H-score 的计算方法
H-score(histoscore,组织化学评分)把两件事合并为一个数字:有多少细胞着色,以及着色有多强。所评分群体中的每个细胞(通常是肿瘤细胞)被分为 0(阴性)、1+(弱)、2+(中等)或 3+(强)。每个等级的细胞百分比乘以该等级,再把三个乘积相加。
H-score = 1 ×(1+ 细胞 %)+ 2 ×(2+ 细胞 %)+ 3 ×(3+ 细胞 %)
计算示例:30 % 的细胞弱着色,20 % 中等着色,10 % 强着色;其余 40 % 为阴性。H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100,阳性细胞占 60 %。用细胞数计算也是同样的求和:400 个细胞中,120 个弱阳性、80 个中等阳性、40 个强阳性,得到 (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100。
该评分于 20 世纪 80 年代针对雌激素受体染色提出,是一种“同时纳入染色强度和分布”的评估方法,如今已用于许多细胞核、细胞质和细胞膜标记物。
这个数字能说明什么,不能说明什么
- 切片不同,评分相同:100 % 弱阳性细胞和 33 % 强阳性细胞得到的评分都约为 100。请在 H-score 旁边同时报告阳性百分比,或各强度的百分比。
- 没有通用的临界值:多高的评分算“高”或“阳性”,取决于标记物、抗体、检测方法和具体研究。请采用您所遵循的论文或指南中的阈值,并注明出处。
- 肉眼判断强度带有主观性:弱与中等的分界因观察者而异。请对照同一批次染色的对照进行评分,并请第二位阅片者对部分切片评分。
- 对正确的细胞评分:只计数判读该标记物的细胞群体;除非您的方案另有规定,否则排除间质、淋巴细胞、坏死和边缘伪影。
- 计数足够多的细胞:仅由几十个细胞得到的评分,每多算或少算一个细胞都会明显变动。在有代表性的视野中计数数百个细胞是常见的最低要求。
用软件得到相同的评分
图像分析软件通过同样的算术得出这些评分,只是用测量取代了肉眼判断。它找出区域内的每个细胞核,通过颜色反卷积把棕色的 DAB 染色与蓝色的苏木精分开,测量每个细胞核的平均 DAB 光密度,并按您设定的阈值分级:一个阈值区分阳性和阴性,三个阈值区分 1+、2+ 和 3+。
- QuPath(免费,开源):Positive cell detection 使用一个阈值时给出阳性百分比;使用三个阈值时还会报告 H-score。
- Fiji / ImageJ(免费):用 H DAB 向量运行 Colour Deconvolution,然后进行阈值分割和计数;评分的算术需要您自己完成。
- SlideScope:在您选择的区域内计数细胞核,对每个细胞核分级,并同时报告阳性百分比、H-score 和 Allred 评分,所用定义与 QuPath 相同。您也可以通过 Ask Your Slide 用日常语言提问;每个数字都来自本地工具,并附有可供核对的轮廓。仅供科研使用。
无论使用哪种工具,阈值都是人为的选择:请把它们写进方法部分,对照图像检查轮廓,并在需要相互比较的所有切片上保持不变。分步说明:如何定量 IHC 染色。
常见问题
如何计算 H-score?
将弱着色细胞的百分比乘以 1,中等着色细胞的百分比乘以 2,强着色细胞的百分比乘以 3,再把三者相加。弱 30 %、中等 20 %、强 10 % 时,H-score 为 30 + 40 + 30 = 100。
H-score 的范围是多少?
0 到 300。0 分表示没有细胞着色;300 分表示所有细胞均强着色(100 % × 3)。
H-score 多少算阳性?
没有通用的临界值。阈值取决于标记物、抗体和检测方法,以及您所遵循的研究或指南,因此请从该来源获取阈值,并与结果一起报告。
H-score 和 Allred 评分有什么区别?
两者都把着色细胞的数量与着色强度结合起来。H-score 按各强度的百分比加权,范围为 0 到 300。Allred 评分把比例评分(0 到 5)与一个平均强度评分(0 到 3)相加,范围为 0 到 8。
软件能计算 H-score 吗?
能。在 Positive cell detection 中设置三个强度阈值时,QuPath 会报告 H-score;SlideScope 采用相同的定义,报告一个区域的阳性百分比、H-score 和 Allred 评分。两者都按每个细胞核的平均 DAB 光密度分级,因此您选择的阈值应写进方法部分。
这个计算器免费吗?
免费。它在您的浏览器中运行,不会向任何地方发送数据。SlideScope 是同一团队开发的桌面显微镜和病理应用,它是一款付费应用,附带免费示例库(包含所有工具),打开您自己的图像则需要订阅。
资料来源
- McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s(HSCORE)
- Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023(公式和 0 到 300 的范围)
- QuPath 文档:细胞分类、强度阈值和 H-score
这些计算器只为科研和教学做算术。它们不是诊断工具:用于患者诊疗的评分须遵循经过验证的检测方法、该标记物的现行指南以及病理医生的判断。
直接对切片评分,不必手动计数
SlideScope 在您自己的电脑上计数切片某个区域内的细胞核,根据 DAB 染色对每个细胞核分级,并报告阳性百分比、H-score 和 Allred 评分,附有可供核对的轮廓。也可以直接输入问题:Ask Your Slide 会运行相同的工具并展示依据。仅供科研使用。先在内置示例上免费试用所有工具;打开您自己的图像需要订阅。已经决定了?立即订阅。