Calcolatore dell’H-score

Calcolatore dell’H-score

Come si calcola l’H-score

L’H-score (histoscore) riunisce due informazioni in un solo numero: quante cellule sono colorate e con quale intensità. Ogni cellula della popolazione che stai valutando, di solito le cellule tumorali, riceve un grado 0 (negativa), 1+ (debole), 2+ (moderata) o 3+ (forte). La percentuale di cellule di ciascun grado viene moltiplicata per quel grado e i tre prodotti vengono sommati.

H-score = 1 × (% cellule 1+) + 2 × (% cellule 2+) + 3 × (% cellule 3+)

Esempio svolto: il 30 % delle cellule si colora debolmente, il 20 % moderatamente e il 10 % intensamente; il restante 40 % è negativo. H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100, con il 60 % di cellule positive. Dai conteggi si ottiene la stessa somma: su 400 cellule, 120 deboli, 80 moderate e 40 forti danno (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100.

Il punteggio è stato introdotto negli anni ’80 per la colorazione del recettore degli estrogeni, come valutazione che “incorporated both intensity and distribution of staining” (teneva conto sia dell’intensità sia della distribuzione della colorazione), e oggi si usa per molti marcatori nucleari, citoplasmatici e di membrana.

Che cosa il numero può e non può dirti

• Vetrini diversi, stesso punteggio: il 100 % di cellule deboli e il 33 % di cellule forti danno entrambi circa 100. Riporta accanto all’H-score la percentuale di positivi, o la percentuale a ciascuna intensità.
• Nessun cut-off universale: il punteggio che conta come “alto” o “positivo” dipende dal marcatore, dall’anticorpo, dal saggio e dallo studio. Prendi la soglia dall’articolo o dalla linea guida che segui e dichiarala.
• L’intensità a occhio è soggettiva: il punto in cui finisce il debole e inizia il moderato varia da un osservatore all’altro. Valuta rispetto a controlli colorati nella stessa seduta e fai valutare un campione dei vetrini da un secondo lettore.
• Valuta le cellule giuste: conta solo la popolazione cellulare in cui il marcatore viene letto ed escludi stroma, linfociti, necrosi e artefatti dei bordi, salvo diversa indicazione del protocollo.
• Conta abbastanza cellule: un punteggio ottenuto da poche decine di cellule cambia molto a ogni cellula. Alcune centinaia di cellule su campi rappresentativi sono un minimo comune.

Ottenere lo stesso punteggio con un software

Il software di analisi d’immagine arriva a questi punteggi con la stessa aritmetica, sostituendo l’occhio con una misura. Trova ogni nucleo nella regione, separa la colorazione marrone del DAB da quella blu dell’ematossilina con la deconvoluzione del colore, misura la densità ottica DAB media di ogni nucleo e gli assegna un grado rispetto a soglie che imposti tu: una soglia per positivo o negativo, tre per 1+, 2+ e 3+.

• QuPath (gratuito, open source): la Positive cell detection con una soglia dà la percentuale di positivi; con tre soglie riporta anche l’H-score.
• Fiji / ImageJ (gratuito): Colour Deconvolution con i vettori H DAB, poi soglia e conteggio; l’aritmetica del punteggio spetta a te.
• SlideScope: conta i nuclei nella regione che scegli, assegna a ciascuno un grado e riporta insieme percentuale di positivi, H-score e punteggio di Allred, con le stesse definizioni di QuPath. Puoi anche fare la domanda in linguaggio semplice con Ask Your Slide; ogni numero proviene dallo strumento locale, con i contorni da controllare. Solo per uso di ricerca.

Qualunque strumento usi, le soglie sono scelte: scrivile nei metodi, confronta i contorni con l’immagine e mantienile fisse su tutti i vetrini che confronti. Passo per passo: come quantificare la colorazione IHC.

Domande

Fonti

• McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s (l’HSCORE)
• Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023 (formula e intervallo da 0 a 300)
• Documentazione di QuPath: classificazione delle cellule, soglie di intensità e H-score

Questi calcolatori eseguono calcoli per la ricerca e la didattica. Non sono uno strumento diagnostico: la valutazione per la cura del paziente segue il saggio validato, la linea guida attuale per quel marcatore e il giudizio di un patologo.