ניקוד IHC
מחשבון H-score
הזינו את אחוז התאים שנצבעו בכל עוצמה, או את מספר התאים שספרתם, וקבלו את ה-H-score בסולם של 0 עד 300 יחד עם אחוז החיוביים. בהמשך: הנוסחה, דוגמה פתורה, מה המספר יכול ומה הוא לא יכול לומר לכם, ואיך תוכנות לניתוח תמונה מגיעות לאותו ציון.
איך מחשבים את ה-H-score
ה-H-score (histoscore) מאחד שני דברים במספר אחד: כמה תאים נצבעו ובאיזו עוצמה. כל תא באוכלוסייה שאתם מנקדים, בדרך כלל תאי הגידול, מקבל דרגה 0 (שלילי), 1+ (חלש), 2+ (בינוני) או 3+ (חזק). את אחוז התאים בכל דרגה מכפילים בדרגה עצמה, ומחברים את שלוש המכפלות.
H-score = 1 × (% תאים 1+) + 2 × (% תאים 2+) + 3 × (% תאים 3+)
דוגמה פתורה: 30 % מהתאים נצבעים חלש, 20 % בינוני ו-10 % חזק; 40 % הנותרים שליליים. H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100, עם 60 % תאים חיוביים. מספירות זה אותו סכום: מתוך 400 תאים, 120 חלשים, 80 בינוניים ו-40 חזקים נותנים (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100.
הציון הוצג בשנות ה-80 לצביעת קולטני אסטרוגן, כהערכה ש“שילבה גם את העוצמה וגם את הפיזור של הצביעה”, וכיום משתמשים בו לסמנים רבים בגרעין, בציטופלזמה ובממברנה.
מה המספר יכול ומה הוא לא יכול לומר לכם
- שקופיות שונות, אותו ציון: 100 % תאים חלשים ו-33 % תאים חזקים נותנים שניהם בערך 100. דווחו על אחוז החיוביים, או על האחוז בכל עוצמה, לצד ה-H-score.
- אין ערך חיתוך אוניברסלי: הציון שנחשב “גבוה” או “חיובי” תלוי בסמן, בנוגדן, בבדיקה ובמחקר. קחו את הסף מהמאמר או מההנחיה שאתם עובדים לפיהם, וציינו אותו.
- הערכת עוצמה בעין היא סובייקטיבית: הנקודה שבה חלש נגמר ובינוני מתחיל משתנה בין צופים. נקדו מול ביקורות שנצבעו באותה הרצה, ותנו לקורא שני לנקד מדגם מהשקופיות.
- נקדו את התאים הנכונים: ספרו רק את אוכלוסיית התאים שבה הסמן נקרא, והשאירו בחוץ סטרומה, לימפוציטים, נמק וארטיפקטים בשוליים, אלא אם הפרוטוקול שלכם קובע אחרת.
- ספרו מספיק תאים: ציון מכמה עשרות תאים זז הרבה עם כל תא. כמה מאות תאים בשדות מייצגים הם מינימום מקובל.
אותו ציון מתוכנה
תוכנות לניתוח תמונה מגיעות לציונים האלה באותו חשבון, כשמדידה מחליפה את העין. הן מאתרות כל גרעין באזור, מפרידות את צבע ה-DAB החום מההמטוקסילין הכחול בפירוק צבעים (colour deconvolution), מודדות את הצפיפות האופטית הממוצעת של DAB בכל גרעין ומדרגות אותו לפי ספים שאתם קובעים: סף אחד לחיובי או שלילי, ושלושה ספים ל-1+, 2+ ו-3+.
- QuPath (חינמי, קוד פתוח): Positive cell detection עם סף אחד נותן את אחוז החיוביים; עם שלושה ספים הוא מדווח גם על H-score.
- Fiji / ImageJ (חינמי): Colour Deconvolution עם וקטורי H DAB, ואחר כך סף וספירה; את חישוב הציון תעשו בעצמכם.
- SlideScope: סופר את הגרעינים באזור שבחרתם, מדרג כל אחד מהם ומדווח על אחוז החיוביים, H-score וציון Allred יחד, לפי אותן הגדרות של QuPath. אפשר גם לשאול בשפה פשוטה עם Ask Your Slide; כל מספר מגיע מהכלי המקומי, עם קווי מתאר לבדיקה. לשימוש מחקרי בלבד.
בכל כלי שתבחרו, הספים הם בחירה שלכם: כתבו אותם בפרק השיטות, בדקו את קווי המתאר מול התמונה, והשאירו אותם קבועים בכל השקופיות שאתם משווים. צעד אחר צעד: איך לכמת צביעת IHC.
שאלות
איך מחשבים H-score?
הכפילו את אחוז התאים שנצבעו חלש ב-1, את אלה שנצבעו בינוני ב-2 ואת אלה שנצבעו חזק ב-3, ואז חברו את שלוש התוצאות. עם 30 % חלשים, 20 % בינוניים ו-10 % חזקים ה-H-score הוא 30 + 40 + 30 = 100.
מה הטווח של ה-H-score?
0 עד 300. ציון 0 פירושו שאף תא לא נצבע; 300 פירושו שכל התאים נצבעו חזק (100 % × 3).
איזה H-score נחשב חיובי?
אין ערך חיתוך אוניברסלי. הסף תלוי בסמן, בנוגדן ובבדיקה, ובמחקר או בהנחיה שאתם עובדים לפיהם, לכן קחו אותו מאותו מקור ודווחו עליו יחד עם התוצאה.
מה ההבדל בין H-score לציון Allred?
שניהם משלבים את מספר התאים שנצבעו עם עוצמת הצביעה. ה-H-score משקלל את האחוז בכל עוצמה ונע מ-0 עד 300. ציון Allred מחבר ציון שיעור (0 עד 5) לציון עוצמה ממוצעת אחד (0 עד 3) ונע מ-0 עד 8.
האם תוכנה יכולה לחשב H-score?
כן. QuPath מדווח עליו כשמגדירים שלושה ספי עוצמה ב-Positive cell detection, ו-SlideScope מדווח על אחוז החיוביים, H-score וציון Allred לאזור לפי אותן הגדרות. שניהם מדרגים כל גרעין לפי הצפיפות האופטית הממוצעת של DAB בו, ולכן הספים שאתם בוחרים צריכים להופיע בפרק השיטות.
האם המחשבון הזה חינמי?
כן. הוא רץ בדפדפן שלכם ולא שולח דבר לשום מקום. SlideScope, אפליקציית המיקרוסקופיה והפתולוגיה למחשב של אותו צוות, היא אפליקציה בתשלום עם ספריית דוגמאות חינמית (כל הכלים) ומנוי לתמונות שלכם.
מקורות
- McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s (ה-HSCORE)
- Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023 (הנוסחה והטווח 0 עד 300)
- התיעוד של QuPath: סיווג תאים, ספי עוצמה ו-H-score
המחשבונים האלה מבצעים חישובים למחקר ולהוראה. הם אינם כלי אבחוני: ניקוד לצורך טיפול בחולים נעשה לפי הבדיקה המתוקפת, ההנחיה העדכנית לאותו סמן ושיקול דעתו של פתולוג.
נקדו את השקופית במקום לספור ביד
SlideScope סופר את הגרעינים באזור בשקופית שלכם, מדרג כל אחד מהם לפי צביעת ה-DAB שלו, ומדווח על אחוז החיוביים, H-score וציון Allred עם קווי המתאר לבדיקה, במחשב שלכם. או הקלידו את השאלה: Ask Your Slide מריץ את אותם כלים ומציג את הראיות. לשימוש מחקרי בלבד. נסו כל כלי בחינם על הדוגמאות המובנות; פתיחת התמונות שלכם דורשת מנוי. כבר החלטתם? הרשמה למנוי עכשיו.