Kalkulator H-score

Kalkulator H-score

Jak oblicza się H-score

H-score (histoscore) łączy w jednej liczbie dwie informacje: ile komórek jest wybarwionych i jak silnie. Każda komórka ocenianej populacji, zwykle komórek nowotworowych, otrzymuje stopień 0 (ujemna), 1+ (słaba), 2+ (umiarkowana) lub 3+ (silna). Odsetek komórek o danym stopniu mnoży się przez ten stopień, a trzy iloczyny się sumuje.

H-score = 1 × (% komórek 1+) + 2 × (% komórek 2+) + 3 × (% komórek 3+)

Przykład obliczenia: 30% komórek barwi się słabo, 20% umiarkowanie, a 10% silnie; pozostałe 40% jest ujemnych. H-score = 30 × 1 + 20 × 2 + 10 × 3 = 100, przy 60% komórek dodatnich. Z liczby komórek wychodzi ta sama suma: spośród 400 komórek 120 słabych, 80 umiarkowanych i 40 silnych daje (120 + 160 + 120) ÷ 400 × 100 = 100.

Wynik wprowadzono w latach 80. do oceny barwienia receptora estrogenowego jako ocenę, która „uwzględniała zarówno intensywność, jak i rozkład barwienia”, a dziś stosuje się go do wielu markerów jądrowych, cytoplazmatycznych i błonowych.

Co ta liczba mówi, a czego nie

• Różne preparaty, ten sam wynik: 100% komórek słabo wybarwionych i 33% komórek silnie wybarwionych daje w obu przypadkach około 100. Obok H-score podawaj odsetek komórek dodatnich albo odsetek dla każdej intensywności.
• Nie ma uniwersalnego punktu odcięcia: to, jaki wynik uznaje się za „wysoki” lub „dodatni”, zależy od markera, przeciwciała, testu i badania. Przyjmij próg z publikacji lub wytycznych, którymi się kierujesz, i podaj go.
• Ocena intensywności na oko jest subiektywna: to, gdzie kończy się barwienie słabe, a zaczyna umiarkowane, różni się między obserwatorami. Oceniaj w odniesieniu do kontroli wybarwionych w tej samej serii i poproś drugą osobę o ocenę próby preparatów.
• Oceniaj właściwe komórki: licz tylko populację komórek, w której odczytuje się marker, i pomijaj podścielisko, limfocyty, martwicę oraz artefakty brzeżne, chyba że Twój protokół stanowi inaczej.
• Zlicz wystarczająco dużo komórek: wynik z kilkudziesięciu komórek mocno się zmienia z każdą kolejną komórką. Kilkaset komórek z reprezentatywnych pól to typowe minimum.

Ten sam wynik z oprogramowania

Oprogramowanie do analizy obrazu dochodzi do tych wyników tą samą arytmetyką, tylko oko zastępuje pomiar. Znajduje każde jądro w obszarze, oddziela brązowe barwienie DAB od niebieskiej hematoksyliny metodą dekonwolucji barw, mierzy średnią gęstość optyczną DAB każdego jądra i klasyfikuje je według ustawionych przez Ciebie progów: jednego dla podziału na dodatnie i ujemne, trzech dla 1+, 2+ i 3+.

• QuPath (bezpłatny, open source): Positive cell detection z jednym progiem daje odsetek dodatnich; z trzema progami podaje też H-score.
• Fiji / ImageJ (bezpłatne): Colour Deconvolution z wektorami H DAB, potem progowanie i zliczanie; obliczenie wyniku należy do Ciebie.
• SlideScope: liczy jądra w wybranym przez Ciebie obszarze, klasyfikuje każde z nich i podaje jednocześnie odsetek dodatnich, H-score i wynik Allreda, według tych samych definicji co QuPath. Możesz też zapytać zwykłym językiem za pomocą Ask Your Slide; każda liczba pochodzi z lokalnego narzędzia, z obrysami do sprawdzenia. Wyłącznie do zastosowań badawczych.

Niezależnie od narzędzia progi są wyborem: opisz je w metodach, porównaj obrysy z obrazem i nie zmieniaj ich między preparatami, które porównujesz. Krok po kroku: jak kwantyfikować barwienie IHC.

Pytania

Źródła

• McCarty KS Jr et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986;46(8 Suppl):4244s-4248s (HSCORE)
• Wen Z et al. Deep learning-based H-score quantification of immunohistochemistry-stained images. Mod Pathol 2023 (wzór i zakres od 0 do 300)
• Dokumentacja QuPath: klasyfikacja komórek, progi intensywności i H-score

Te kalkulatory wykonują obliczenia na potrzeby badań naukowych i dydaktyki. Nie są narzędziem diagnostycznym: ocena na potrzeby opieki nad pacjentem odbywa się według zwalidowanego testu, aktualnych wytycznych dla danego markera i oceny patologa.