Культура клітин
Калькулятор посіву клітин
Виберіть планшет або флакон, введіть концентрацію клітин і щільність посіву та отримайте кількість клітин на лунку, скільки клітинної суспензії й середовища змішати і що вносити в кожну лунку. Площі росту для поширених посудин заповнено заздалегідь, але їх можна редагувати, бо в різних виробників вони трохи відрізняються.
Як працює розрахунок посіву
клітин на лунку = щільність × площа · суспензія = клітин на лунку × лунки ÷ концентрація · середовище = об’єм на лунку × лунки − суспензія
Приклад розрахунку: посів у 96-лунковий планшет зі щільністю 20,000 клітин/cm² із суспензії 1 × 10⁶ клітин/mL, 100 µL на лунку, з 10 % запасу. Площа кожної лунки — 0.32 cm², отже, 6,400 клітин на лунку. 96 лунок × 1.1 = обсяг на 105.6 лунки: 675,840 клітин, тобто 0.676 mL суспензії. Загальний об’єм — 10.56 mL, тож додайте 9.88 mL середовища, перемішайте й внесіть по 100 µL у кожну лунку.
Якщо сама лише суспензія перевищує кінцевий об’єм, вихідна суспензія надто розведена для такої щільності: осадіть клітини центрифугуванням, ресуспендуйте в меншому об’ємі середовища й порахуйте знову.
Площі росту та типові об’єми
| Посудина | Площа росту | Середовище | Типовий посів (HeLa) |
|---|---|---|---|
| 6-лунковий планшет | 9.6 cm² | 1–3 mL | 0.3 × 10⁶ на лунку |
| 12-лунковий планшет | 3.5 cm² | 1–2 mL | 0.1 × 10⁶ на лунку |
| 24-лунковий планшет | 1.9 cm² | 0.5–1 mL | 0.05 × 10⁶ на лунку |
| 48-лунковий планшет | 1.1 cm² | 0.2–0.4 mL | 0.03 × 10⁶ на лунку |
| 96-лунковий планшет | 0.32 cm² | 0.1–0.2 mL | 0.01 × 10⁶ на лунку |
| 384-лунковий планшет | 0.084 cm² | ~0.08 mL | 0.0018 × 10⁶ на лунку |
| Чашка 35 / 60 / 100 mm | 8.8 / 21.5 / 56.7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| Флакон T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Значення взято з довідкової таблиці Thermo Fisher для культивування клітин (посуд Nunc). В інших брендів вони дещо відрізняються, наприклад лунка 6-лункового планшета Corning має 9.5 cm²; поле площі вище можна редагувати. Правильна щільність залежить від клітинної лінії та від того, коли культура має досягти конфлюентності, тож вважайте числа для HeLa відправною точкою.
Рівномірний посів
- Порахуйте клітини за допомогою гемоцитометра або автоматичного лічильника безпосередньо перед посівом і використовуйте концентрацію живих клітин.
- Підтримуйте суміш у суспендованому стані: перевертайте її або перемішуйте піпеткою між рядами, бо клітини осідають за лічені хвилини.
- Залиште щойно засіяний планшет рівно на 15–30 хвилин при кімнатній температурі, перш ніж ставити в інкубатор, щоб клітини менше скупчувалися біля країв.
- Для візуалізації зніміть кілька полів у кожній лунці та перевірте щільність на зображеннях: на каліброваному зображенні кількість клітин на mm² отримується безпосередньо з підрахунку.
Запитання
Як розрахувати кількість клітин на лунку?
Помножте щільність посіву в клітинах на cm² на площу росту однієї лунки. Лунка 96-лункового планшета має близько 0.32 cm², тож 20,000 клітин/cm² — це 6,400 клітин на лунку.
Скільки потрібно клітинної суспензії?
Загальна потрібна кількість клітин ÷ концентрація клітин. Для 96 лунок по 6,400 клітин (плюс 10 % запасу) із суспензії 1 × 10⁶ клітин/mL це 675,840 ÷ 1,000,000 ≈ 0.68 mL, доведених середовищем до кінцевого об’єму.
Чи це те саме, що C1V1 = C2V2?
Так. Калькулятор розв’язує C1 × V1 = C2 × V2 для клітин: C1 — концентрація вашої вихідної суспензії, C2 — концентрація суміші для посіву (клітин на лунку ÷ об’єм на лунку), V2 — загальний об’єм, а V1 — об’єм суспензії, який треба взяти.
Яка площа поверхні лунки 96-лункового планшета?
Близько 0.32 cm² для стандартної лунки з плоским дном (і Thermo Fisher, і Corning вказують 0.32 cm²); у 96-лункових планшетах половинної площі — близько 0.16 cm².
Чи цей калькулятор безкоштовний?
Так. Він працює у вашому браузері й нікуди нічого не надсилає. SlideScope, настільна програма для мікроскопії від тієї самої команди, — платна програма з безкоштовною бібліотекою зразків (усі інструменти) і передплатою для ваших власних зображень.
Джерела
Результати теоретичні або арифметичні; звірте їх із документацією вашого приладу, перш ніж покладатися на них у клінічній або регульованій роботі.
Вимірюйте на своїх реальних зображеннях
SlideScope відкриває 34 формати мікроскопів і слайд-сканерів, серед них CZI, ND2, SVS і LIF, з їхнім власним калібруванням, тож довжини, площі, кількість клітин і масштабні лінійки виходять у мкм без жодного налаштування. Спробуйте всі інструменти безкоштовно на вбудованих зразках; щоб відкривати власні зображення, потрібна передплата. Уже вирішили? Оформити передплату зараз.