播種計算のしくみ
ウェルあたりの細胞数 = 密度 × 面積 · 懸濁液量 = ウェルあたりの細胞数 × ウェル数 ÷ 濃度 · 培地量 = ウェルあたりの液量 × ウェル数 − 懸濁液量
計算例：1 × 10⁶ cells/mL の懸濁液から、96 ウェルプレートに 20,000 cells/cm²、ウェルあたり 100 µL で、10 % の余剰を見込んで播種する場合。各ウェルは 0.32 cm² なので、ウェルあたり 6,400 個です。96 ウェル × 1.1 = 105.6 ウェル分で 675,840 個となり、懸濁液 0.676 mL に相当します。総液量は 10.56 mL なので、培地を 9.88 mL 加えて混ぜ、各ウェルに 100 µL ずつ分注します。
懸濁液だけで最終液量を超える場合は、その密度にはストックが薄すぎます。細胞を遠心して沈め、より少ない培地に再懸濁してから、もう一度カウントしてください。
培養面積と一般的な液量
| 容器 | 培養面積 | 媒質 | 一般的な播種数（HeLa） |
|---|---|---|---|
| 6 ウェルプレート | 9.6 cm² | 1〜3 mL | ウェルあたり 0.3 × 10⁶ |
| 12 ウェルプレート | 3.5 cm² | 1〜2 mL | ウェルあたり 0.1 × 10⁶ |
| 24 ウェルプレート | 1.9 cm² | 0.5〜1 mL | ウェルあたり 0.05 × 10⁶ |
| 48 ウェルプレート | 1.1 cm² | 0.2〜0.4 mL | ウェルあたり 0.03 × 10⁶ |
| 96 ウェルプレート | 0.32 cm² | 0.1〜0.2 mL | ウェルあたり 0.01 × 10⁶ |
| 384 ウェルプレート | 0.084 cm² | 約 0.08 mL | ウェルあたり 0.0018 × 10⁶ |
| 35 / 60 / 100 mm ディッシュ | 8.8 / 21.5 / 56.7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| T-25 / T-75 / T-175 フラスコ | 25 / 75 / 175 cm² | 3〜5 / 8〜15 / 35〜53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
数値は Thermo Fisher の細胞培養リファレンス表（Nunc 製容器）によるものです。他社製品では若干異なり、たとえば Corning の 6 ウェルは 9.5 cm² です。上の面積欄は編集できます。適切な密度は細胞株や、培養をいつコンフルエントにしたいかによって変わるため、HeLa の数値は出発点としてお使いください。
均一に播種するには
- 播種の直前に血球計算盤または自動セルカウンターでカウントし、生細胞の濃度を使います。
- 混合液を懸濁状態に保ちます。細胞は数分で沈むため、列ごとに転倒混和するかピペッティングしてください。
- 播種直後のプレートは、インキュベーターに入れる前に室温で 15〜30 分水平に置いておくと、ウェルの縁に細胞が偏るのを抑えられます。
- イメージングでは、ウェルごとに数視野を撮影し、画像で密度を確認します。校正済みの画像なら、カウントからそのまま mm² あたりの細胞数がわかります。
質問
ウェルあたりの細胞数はどう計算しますか？
cm² あたりの播種密度に 1 ウェルの培養面積を掛けます。96 ウェルプレートのウェルは約 0.32 cm² なので、20,000 cells/cm² ならウェルあたり 6,400 個です。
細胞懸濁液はどれくらい必要ですか？
必要な総細胞数 ÷ 細胞濃度です。1 × 10⁶ cells/mL から 6,400 個 × 96 ウェル（10 % の余剰込み）なら、675,840 ÷ 1,000,000 ≈ 0.68 mL で、これに培地を加えて最終液量にします。
これは C1V1 = C2V2 と同じですか？
はい。この計算ツールは細胞について C1 × V1 = C2 × V2 を解きます。C1 はストックの濃度、C2 は播種用混合液の濃度（ウェルあたりの細胞数 ÷ ウェルあたりの液量）、V2 は総液量、V1 は取る懸濁液の量です。
96 ウェルプレートのウェルの表面積はどれくらいですか？
標準的な平底ウェルで約 0.32 cm² です（Thermo Fisher と Corning はいずれも 0.32 cm² としています）。ハーフエリアの 96 ウェルプレートは約 0.16 cm² です。
この計算ツールは無料ですか？
はい。ブラウザー内で動作し、どこにもデータを送信しません。同じチームが開発したデスクトップ顕微鏡アプリ SlideScope は、無料のサンプルライブラリ（全ツール利用可）が付属する有料アプリで、ご自身の画像にはサブスクリプションが必要です。
出典
結果は理論値または計算値です。臨床業務や規制対象の業務で用いる前に、お使いの機器の資料と照らし合わせて確認してください。
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