Cultura de células
Calculadora de semeadura de células
Escolha a placa ou o frasco, informe a concentração de células e a densidade de semeadura e obtenha o número de células por poço, quanto de suspensão celular e de meio misturar e o que vai em cada poço. As áreas de crescimento já vêm preenchidas para os recipientes mais comuns e continuam editáveis, porque variam um pouco entre fabricantes.
Como funciona o cálculo de semeadura
células por poço = densidade × área · suspensão = células por poço × poços ÷ concentração · meio = volume por poço × poços − suspensão
Exemplo resolvido: semear uma placa de 96 poços a 20.000 células/cm² a partir de uma suspensão de 1 × 10⁶ células/mL, com 100 µL por poço e 10% a mais. Cada poço tem 0,32 cm², então são 6.400 células por poço. 96 poços × 1,1 = o equivalente a 105,6 poços: 675.840 células, o que corresponde a 0,676 mL de suspensão. O volume total é 10,56 mL, então adicione 9,88 mL de meio, misture e coloque 100 µL em cada poço.
Se só a suspensão já ultrapassar o volume final, o estoque está diluído demais para essa densidade: centrifugue as células, ressuspenda em menos meio e conte de novo.
Áreas de crescimento e volumes típicos
| Recipiente | Área de crescimento | Meio | Semeadura típica (HeLa) |
|---|---|---|---|
| Placa de 6 poços | 9,6 cm² | 1–3 mL | 0,3 × 10⁶ por poço |
| Placa de 12 poços | 3,5 cm² | 1–2 mL | 0,1 × 10⁶ por poço |
| Placa de 24 poços | 1,9 cm² | 0,5–1 mL | 0,05 × 10⁶ por poço |
| Placa de 48 poços | 1,1 cm² | 0,2–0,4 mL | 0,03 × 10⁶ por poço |
| Placa de 96 poços | 0,32 cm² | 0,1–0,2 mL | 0,01 × 10⁶ por poço |
| Placa de 384 poços | 0,084 cm² | ~0,08 mL | 0,0018 × 10⁶ por poço |
| Placa de Petri de 35 / 60 / 100 mm | 8,8 / 21,5 / 56,7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| Frasco T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Valores da tabela de referência de cultura de células da Thermo Fisher (recipientes Nunc). Outras marcas variam um pouco; por exemplo, um poço de placa de 6 poços da Corning tem 9,5 cm²; o campo de área acima é editável. A densidade certa depende da linhagem celular e de quando você quer que a cultura atinja a confluência, então trate os números da HeLa como ponto de partida.
Semeadura uniforme
- Conte com um hemocitômetro ou um contador automático logo antes de semear e use a concentração de células vivas.
- Mantenha a mistura em suspensão: inverta ou pipete entre as fileiras, porque as células sedimentam em poucos minutos.
- Deixe a placa recém-semeada em repouso, na horizontal, à temperatura ambiente por 15–30 minutos antes de levá-la à incubadora, para reduzir o acúmulo nas bordas.
- Para imagem, capture alguns campos por poço e confira a densidade nas imagens: com uma imagem calibrada, as células por mm² saem diretamente de uma contagem.
Perguntas
Como calcular células por poço?
Multiplique a densidade de semeadura em células por cm² pela área de crescimento de um poço. Um poço de placa de 96 poços tem cerca de 0,32 cm², então 20.000 células/cm² equivalem a 6.400 células por poço.
Quanto de suspensão celular eu preciso?
Total de células necessárias ÷ concentração de células. Para 96 poços de 6.400 células (mais 10% a mais) a partir de 1 × 10⁶ células/mL, são 675.840 ÷ 1.000.000 ≈ 0,68 mL, completados com meio até o volume final.
Isto é o mesmo que C1V1 = C2V2?
Sim. A calculadora resolve C1 × V1 = C2 × V2 para células: C1 é a concentração do seu estoque, C2 a concentração da mistura de semeadura (células por poço ÷ volume por poço), V2 o volume total e V1 a suspensão a retirar.
Qual é a área de superfície de um poço de placa de 96 poços?
Cerca de 0,32 cm² para um poço padrão de fundo plano (a Thermo Fisher e a Corning informam 0,32 cm²); placas de 96 poços de meia área têm cerca de 0,16 cm².
Esta calculadora é gratuita?
Sim. Ela roda no seu navegador e não envia nada a lugar nenhum. O SlideScope, o aplicativo de microscopia para desktop feito pela mesma equipe, é um aplicativo pago com uma biblioteca de amostras gratuita (todas as ferramentas) e uma assinatura para suas próprias imagens.
Fontes
Os resultados são teóricos ou aritméticos; confira-os com a documentação do seu instrumento antes de usá-los em trabalhos clínicos ou regulamentados.
Meça nas suas imagens reais
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