Máy tính cấy tế bào

Máy tính cấy tế bào

Cách tính khi cấy tế bào

số tế bào mỗi giếng = mật độ × diện tích  ·  dịch huyền phù = số tế bào mỗi giếng × số giếng ÷ nồng độ  ·  môi trường = thể tích mỗi giếng × số giếng − dịch huyền phù

Ví dụ: cấy một đĩa 96 giếng với mật độ 20.000 tế bào/cm² từ dịch huyền phù 1 × 10⁶ tế bào/mL, 100 µL mỗi giếng, dư thêm 10 %. Mỗi giếng rộng 0,32 cm², nên mỗi giếng có 6.400 tế bào. 96 giếng × 1,1 = lượng cho 105,6 giếng: 675.840 tế bào, tức 0,676 mL dịch huyền phù. Tổng thể tích là 10,56 mL, nên thêm 9,88 mL môi trường, trộn đều và cho 100 µL vào mỗi giếng.

Nếu riêng lượng dịch huyền phù đã nhiều hơn thể tích cuối cùng, dịch gốc quá loãng cho mật độ đó: hãy ly tâm lắng tế bào, tái huyền phù trong ít môi trường hơn và đếm lại.

Diện tích nuôi cấy và thể tích thường dùng

Số liệu lấy từ bảng tham khảo nuôi cấy tế bào của Thermo Fisher (dụng cụ Nunc). Các hãng khác hơi khác một chút, ví dụ giếng của đĩa 6 giếng Corning là 9,5 cm²; ô diện tích ở trên có thể chỉnh sửa. Mật độ phù hợp phụ thuộc vào dòng tế bào và thời điểm bạn muốn tế bào đạt độ phủ kín (confluence), vì vậy hãy coi các số liệu HeLa là điểm khởi đầu.

Cấy tế bào đồng đều

• Đếm bằng buồng đếm hồng cầu hoặc máy đếm tự động ngay trước khi cấy, và dùng nồng độ tế bào sống.
• Giữ hỗn hợp ở trạng thái huyền phù: đảo ngược hoặc hút trộn bằng pipet giữa các hàng, vì tế bào lắng xuống chỉ trong vài phút.
• Để đĩa vừa cấy nằm phẳng ở nhiệt độ phòng 15–30 phút trước khi cho vào tủ ấm để giảm tình trạng tế bào dồn ra mép giếng.
• Khi chụp ảnh, hãy chụp vài trường cho mỗi giếng và kiểm tra mật độ trên ảnh: với ảnh đã hiệu chuẩn, số tế bào trên mỗi mm² có ngay từ kết quả đếm.

Câu hỏi

Nguồn

• Thermo Fisher — Các số liệu hữu ích cho nuôi cấy tế bào

Kết quả mang tính lý thuyết hoặc số học; hãy đối chiếu với tài liệu của thiết bị trước khi dựa vào chúng cho công việc lâm sàng hoặc công việc chịu quản lý.