सेल कल्चर
सेल सीडिंग कैलकुलेटर
प्लेट या फ़्लास्क चुनें, अपनी कोशिका सांद्रता और सीडिंग घनत्व डालें, और जानें कि प्रति वेल कितनी कोशिकाएँ होंगी, कितना सेल सस्पेंशन और मीडियम मिलाना है, और हर वेल में क्या डालना है। आम बर्तनों के लिए ग्रोथ एरिया पहले से भरे होते हैं और बदले जा सकते हैं, क्योंकि ये निर्माताओं के बीच थोड़े अलग होते हैं।
सीडिंग की गणना कैसे होती है
प्रति वेल कोशिकाएँ = घनत्व × एरिया · सस्पेंशन = प्रति वेल कोशिकाएँ × वेल ÷ सांद्रता · मीडियम = प्रति वेल आयतन × वेल − सस्पेंशन
हल किया गया उदाहरण: 1 × 10⁶ कोशिकाएँ/mL वाले सस्पेंशन से 96-वेल प्लेट को 20,000 कोशिकाएँ/cm² पर सीड करना, प्रति वेल 100 µL, 10 % अतिरिक्त के साथ। हर वेल 0.32 cm² का है, इसलिए प्रति वेल 6,400 कोशिकाएँ। 96 वेल × 1.1 = 105.6 वेल के बराबर: 675,840 कोशिकाएँ, यानी 0.676 mL सस्पेंशन। कुल आयतन 10.56 mL है, इसलिए 9.88 mL मीडियम मिलाएँ, अच्छी तरह मिक्स करें, और हर वेल में 100 µL डालें।
अगर अकेला सस्पेंशन ही अंतिम आयतन से ज़्यादा है, तो उस घनत्व के लिए स्टॉक बहुत पतला है: कोशिकाओं को स्पिन डाउन करें, कम मीडियम में रीसस्पेंड करें, और फिर से गिनें।
ग्रोथ एरिया और आम आयतन
| बर्तन | ग्रोथ एरिया | मीडियम | आम सीडिंग (HeLa) |
|---|---|---|---|
| 6-वेल प्लेट | 9.6 cm² | 1–3 mL | 0.3 × 10⁶ प्रति वेल |
| 12-वेल प्लेट | 3.5 cm² | 1–2 mL | 0.1 × 10⁶ प्रति वेल |
| 24-वेल प्लेट | 1.9 cm² | 0.5–1 mL | 0.05 × 10⁶ प्रति वेल |
| 48-वेल प्लेट | 1.1 cm² | 0.2–0.4 mL | 0.03 × 10⁶ प्रति वेल |
| 96-वेल प्लेट | 0.32 cm² | 0.1–0.2 mL | 0.01 × 10⁶ प्रति वेल |
| 384-वेल प्लेट | 0.084 cm² | ~0.08 mL | 0.0018 × 10⁶ प्रति वेल |
| 35 / 60 / 100 mm डिश | 8.8 / 21.5 / 56.7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| T-25 / T-75 / T-175 फ़्लास्क | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
मान Thermo Fisher की सेल कल्चर संदर्भ तालिका (Nunc बर्तन) से लिए गए हैं। दूसरे ब्रांड थोड़े अलग होते हैं, जैसे Corning का 6-वेल 9.5 cm² का है; ऊपर दिया एरिया फ़ील्ड बदला जा सकता है। सही घनत्व सेल लाइन पर और इस पर निर्भर करता है कि आप कल्चर को कब कॉन्फ़्लुएंस तक पहुँचाना चाहते हैं, इसलिए HeLa के आँकड़ों को शुरुआती बिंदु मानें।
समान रूप से सीड करना
- सीड करने से ठीक पहले हीमोसाइटोमीटर या ऑटोमेटेड काउंटर से गिनती करें, और जीवित कोशिकाओं की सांद्रता का उपयोग करें।
- मिश्रण को सस्पेंशन में बनाए रखें: पंक्तियों के बीच इसे उलटें या पिपेट करें, क्योंकि कोशिकाएँ कुछ ही मिनटों में नीचे बैठ जाती हैं।
- किनारों पर कोशिकाओं की भीड़ कम करने के लिए, नई सीड की गई प्लेट को इनक्यूबेटर में रखने से पहले 15–30 मिनट तक कमरे के तापमान पर समतल रखें।
- इमेजिंग के लिए, हर वेल के कुछ फ़ील्ड की इमेज लें और इमेज पर घनत्व जाँचें: कैलिब्रेटेड इमेज हो, तो प्रति mm² कोशिकाएँ सीधे गिनती से मिल जाती हैं।
प्रश्न
प्रति वेल कोशिकाएँ कैसे निकालें?
प्रति cm² कोशिकाओं में सीडिंग घनत्व को एक वेल के ग्रोथ एरिया से गुणा करें। 96-वेल प्लेट का एक वेल लगभग 0.32 cm² का होता है, इसलिए 20,000 कोशिकाएँ/cm² का अर्थ है प्रति वेल 6,400 कोशिकाएँ।
मुझे कितना सेल सस्पेंशन चाहिए?
कुल ज़रूरी कोशिकाएँ ÷ कोशिका सांद्रता। 1 × 10⁶ कोशिकाएँ/mL से 6,400 कोशिकाओं वाले 96 वेल (साथ में 10 % अतिरिक्त) के लिए यह 675,840 ÷ 1,000,000 ≈ 0.68 mL है, जिसे मीडियम से अंतिम आयतन तक पूरा किया जाता है।
क्या यह C1V1 = C2V2 जैसा ही है?
हाँ। कैलकुलेटर कोशिकाओं के लिए C1 × V1 = C2 × V2 हल करता है: C1 आपकी स्टॉक सांद्रता है, C2 सीडिंग मिश्रण की सांद्रता (प्रति वेल कोशिकाएँ ÷ प्रति वेल आयतन), V2 कुल आयतन, और V1 लेने वाला सस्पेंशन।
96-वेल प्लेट के एक वेल का सतह क्षेत्रफल कितना होता है?
एक सामान्य फ़्लैट-बॉटम वेल के लिए लगभग 0.32 cm² (Thermo Fisher और Corning दोनों 0.32 cm² बताते हैं); हाफ़-एरिया 96-वेल प्लेट लगभग 0.16 cm² की होती हैं।
क्या यह कैलकुलेटर मुफ़्त है?
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स्रोत
परिणाम सैद्धांतिक या अंकगणितीय हैं; क्लिनिकल या विनियमित काम में इन पर भरोसा करने से पहले इन्हें अपने उपकरण के दस्तावेज़ों से मिलाकर जाँच लें।
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