Hodowla komórkowa
Kalkulator wysiewu komórek
Wybierz płytkę lub butelkę, wpisz stężenie komórek i gęstość wysiewu, a otrzymasz liczbę komórek na dołek, ilość zawiesiny komórek i pożywki do zmieszania oraz to, co trafia do każdego dołka. Powierzchnie wzrostu są wpisane dla typowych naczyń i można je edytować, bo nieco różnią się między producentami.
Jak działa obliczanie wysiewu
komórki na dołek = gęstość × powierzchnia · zawiesina = komórki na dołek × liczba dołków ÷ stężenie · pożywka = objętość na dołek × liczba dołków − zawiesina
Przykład: wysiew na płytkę 96-dołkową przy gęstości 20 000 komórek/cm² z zawiesiny 1 × 10⁶ komórek/mL, 100 µL na dołek, z 10 % nadmiaru. Każdy dołek ma 0,32 cm², więc to 6400 komórek na dołek. 96 dołków × 1,1 = odpowiednik 105,6 dołka: 675 840 komórek, czyli 0,676 mL zawiesiny. Objętość całkowita wynosi 10,56 mL, więc dodaj 9,88 mL pożywki, wymieszaj i nanieś 100 µL do każdego dołka.
Jeśli sama zawiesina przekracza objętość końcową, zawiesina wyjściowa jest zbyt rozcieńczona dla tej gęstości: odwiruj komórki, zawieś je ponownie w mniejszej ilości pożywki i policz jeszcze raz.
Powierzchnie wzrostu i typowe objętości
| Naczynie | Powierzchnia wzrostu | Pożywka | Typowy wysiew (HeLa) |
|---|---|---|---|
| Płytka 6-dołkowa | 9,6 cm² | 1–3 mL | 0,3 × 10⁶ na dołek |
| Płytka 12-dołkowa | 3,5 cm² | 1–2 mL | 0,1 × 10⁶ na dołek |
| Płytka 24-dołkowa | 1,9 cm² | 0,5–1 mL | 0,05 × 10⁶ na dołek |
| Płytka 48-dołkowa | 1,1 cm² | 0,2–0,4 mL | 0,03 × 10⁶ na dołek |
| Płytka 96-dołkowa | 0,32 cm² | 0,1–0,2 mL | 0,01 × 10⁶ na dołek |
| Płytka 384-dołkowa | 0,084 cm² | ~0,08 mL | 0,0018 × 10⁶ na dołek |
| Szalka 35 / 60 / 100 mm | 8,8 / 21,5 / 56,7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| Butelka T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Wartości z tabeli referencyjnej Thermo Fisher dla hodowli komórkowych (naczynia Nunc). Inne marki nieznacznie się różnią, np. dołek płytki 6-dołkowej Corning ma 9,5 cm²; pole powierzchni powyżej można edytować. Właściwa gęstość zależy od linii komórkowej i od tego, kiedy hodowla ma osiągnąć konfluencję, więc liczby dla HeLa traktuj jako punkt wyjścia.
Równomierny wysiew
- Policz komórki hemocytometrem lub automatycznym licznikiem tuż przed wysiewem i używaj stężenia żywych komórek.
- Utrzymuj mieszaninę w zawiesinie: odwracaj ją lub pipetuj między rzędami, bo komórki opadają w ciągu kilku minut.
- Pozostaw świeżo obsianą płytkę na płasko w temperaturze pokojowej przez 15–30 minut przed włożeniem do inkubatora, aby ograniczyć zagęszczenie komórek przy brzegach.
- Przy obrazowaniu zarejestruj kilka pól w każdym dołku i sprawdź gęstość na obrazach: przy skalibrowanym obrazie liczba komórek na mm² wynika wprost z liczenia.
Pytania
Jak obliczyć liczbę komórek na dołek?
Pomnóż gęstość wysiewu w komórkach na cm² przez powierzchnię wzrostu jednego dołka. Dołek płytki 96-dołkowej ma około 0,32 cm², więc 20 000 komórek/cm² to 6400 komórek na dołek.
Ile zawiesiny komórek potrzebuję?
Łączna liczba potrzebnych komórek ÷ stężenie komórek. Dla 96 dołków po 6400 komórek (plus 10 % nadmiaru) z zawiesiny 1 × 10⁶ komórek/mL to 675 840 ÷ 1 000 000 ≈ 0,68 mL, uzupełnione pożywką do objętości końcowej.
Czy to to samo co C1V1 = C2V2?
Tak. Kalkulator rozwiązuje C1 × V1 = C2 × V2 dla komórek: C1 to stężenie zawiesiny wyjściowej, C2 stężenie mieszaniny do wysiewu (komórki na dołek ÷ objętość na dołek), V2 objętość całkowita, a V1 zawiesina do pobrania.
Jaka jest powierzchnia dołka płytki 96-dołkowej?
Około 0,32 cm² dla standardowego dołka z płaskim dnem (Thermo Fisher i Corning podają 0,32 cm²); płytki 96-dołkowe o połowie powierzchni (half-area) mają około 0,16 cm².
Czy ten kalkulator jest bezpłatny?
Tak. Działa w Twojej przeglądarce internetowej i nigdzie niczego nie wysyła. SlideScope, desktopowa aplikacja mikroskopowa tego samego zespołu, to płatna aplikacja z bezpłatną biblioteką przykładów (wszystkie narzędzia) i subskrypcją na własne obrazy.
Źródła
Wyniki są teoretyczne lub arytmetyczne; zanim oprzesz się na nich w pracy klinicznej lub regulowanej, sprawdź je w dokumentacji swojego przyrządu.
Mierz na swoich prawdziwych obrazach
SlideScope otwiera 34 formaty mikroskopów i skanerów preparatów, w tym CZI, ND2, SVS i LIF, z ich własną kalibracją, więc długości, pola powierzchni, liczby komórek i paski skali wychodzą w µm bez żadnej konfiguracji. Wypróbuj wszystkie narzędzia bezpłatnie na wbudowanych przykładach; do otwierania własnych obrazów potrzebna jest subskrypcja. Już zdecydowane? Subskrybuj teraz.