การเพาะเลี้ยงเซลล์
เครื่องคำนวณการเพาะเลี้ยงเซลล์ (cell seeding)
เลือกเพลตหรือขวดเลี้ยงเซลล์ ใส่ความเข้มข้นของเซลล์และความหนาแน่นในการเพาะเซลล์ แล้วรับจำนวนเซลล์ต่อหลุม ปริมาตรสารแขวนลอยเซลล์และอาหารเลี้ยงเซลล์ที่ต้องผสม และปริมาตรที่ต้องใส่ในแต่ละหลุม พื้นที่ผิวสำหรับการเจริญของภาชนะทั่วไปถูกกรอกไว้ให้แล้วและแก้ไขได้ เนื่องจากแต่ละผู้ผลิตมีค่าต่างกันเล็กน้อย
การคำนวณการเพาะเซลล์ทำงานอย่างไร
เซลล์ต่อหลุม = ความหนาแน่น × พื้นที่ · สารแขวนลอย = เซลล์ต่อหลุม × จำนวนหลุม ÷ ความเข้มข้น · อาหารเลี้ยงเซลล์ = ปริมาตรต่อหลุม × จำนวนหลุม − สารแขวนลอย
ตัวอย่างการคำนวณ: เพาะเซลล์ในเพลต 96 หลุมที่ 20,000 เซลล์/cm² จากสารแขวนลอยความเข้มข้น 1 × 10⁶ เซลล์/mL หลุมละ 100 µL โดยเผื่อเพิ่ม 10 % แต่ละหลุมมีพื้นที่ 0.32 cm² จึงได้ 6,400 เซลล์ต่อหลุม 96 หลุม × 1.1 = เทียบเท่า 105.6 หลุม: 675,840 เซลล์ ซึ่งเท่ากับสารแขวนลอย 0.676 mL ปริมาตรรวมคือ 10.56 mL จึงเติมอาหารเลี้ยงเซลล์ 9.88 mL ผสมให้เข้ากัน แล้วใส่หลุมละ 100 µL
หากปริมาตรสารแขวนลอยอย่างเดียวมากกว่าปริมาตรสุดท้าย แสดงว่าสารตั้งต้นเจือจางเกินไปสำหรับความหนาแน่นนั้น: ให้ปั่นตกตะกอนเซลล์ ละลายกลับในอาหารเลี้ยงเซลล์ปริมาณน้อยลง แล้วนับใหม่
พื้นที่ผิวสำหรับการเจริญและปริมาตรทั่วไป
| ภาชนะ | พื้นที่ผิวสำหรับการเจริญ | อาหารเลี้ยงเชื้อ | การเพาะเซลล์ทั่วไป (HeLa) |
|---|---|---|---|
| เพลต 6 หลุม | 9.6 cm² | 1–3 mL | 0.3 × 10⁶ ต่อหลุม |
| เพลต 12 หลุม | 3.5 cm² | 1–2 mL | 0.1 × 10⁶ ต่อหลุม |
| เพลต 24 หลุม | 1.9 cm² | 0.5–1 mL | 0.05 × 10⁶ ต่อหลุม |
| เพลต 48 หลุม | 1.1 cm² | 0.2–0.4 mL | 0.03 × 10⁶ ต่อหลุม |
| เพลต 96 หลุม | 0.32 cm² | 0.1–0.2 mL | 0.01 × 10⁶ ต่อหลุม |
| เพลต 384 หลุม | 0.084 cm² | ~0.08 mL | 0.0018 × 10⁶ ต่อหลุม |
| จาน 35 / 60 / 100 mm | 8.8 / 21.5 / 56.7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| ขวด T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
ค่าจากตารางอ้างอิงการเพาะเลี้ยงเซลล์ของ Thermo Fisher (ภาชนะ Nunc) ยี่ห้ออื่นอาจต่างกันเล็กน้อย เช่น เพลต 6 หลุมของ Corning มีพื้นที่ 9.5 cm² ช่องพื้นที่ด้านบนแก้ไขได้ ความหนาแน่นที่เหมาะสมขึ้นอยู่กับสายพันธุ์เซลล์และเวลาที่คุณต้องการให้เซลล์เจริญเต็มพื้นที่ (confluence) จึงควรใช้ตัวเลขของ HeLa เป็นเพียงจุดเริ่มต้น
การเพาะเซลล์ให้สม่ำเสมอ
- นับเซลล์ด้วยฮีโมไซโตมิเตอร์หรือเครื่องนับอัตโนมัติก่อนเพาะเซลล์ทันที และใช้ความเข้มข้นของเซลล์มีชีวิต
- รักษาให้ส่วนผสมอยู่ในสภาพแขวนลอย: กลับหลอดหรือปิเปตผสมระหว่างแต่ละแถว เพราะเซลล์จะตกตะกอนภายในไม่กี่นาที
- วางเพลตที่เพิ่งเพาะเซลล์ไว้ในแนวราบที่อุณหภูมิห้อง 15–30 นาทีก่อนนำเข้าตู้บ่มเพาะ เพื่อลดการกระจุกตัวของเซลล์ที่ขอบหลุม
- สำหรับงานถ่ายภาพ ให้ถ่ายภาพหลายบริเวณต่อหลุมและตรวจสอบความหนาแน่นจากภาพ: เมื่อภาพปรับเทียบแล้ว จำนวนเซลล์ต่อ mm² ได้มาจากผลการนับโดยตรง
คำถาม
คำนวณจำนวนเซลล์ต่อหลุมอย่างไร?
นำความหนาแน่นในการเพาะเซลล์ (เซลล์ต่อ cm²) คูณกับพื้นที่ผิวสำหรับการเจริญของหนึ่งหลุม หลุมของเพลต 96 หลุมมีพื้นที่ประมาณ 0.32 cm² ดังนั้น 20,000 เซลล์/cm² เท่ากับ 6,400 เซลล์ต่อหลุม
ต้องใช้สารแขวนลอยเซลล์เท่าไร?
จำนวนเซลล์ที่ต้องใช้ทั้งหมด ÷ ความเข้มข้นของเซลล์ สำหรับ 96 หลุม หลุมละ 6,400 เซลล์ (บวกเผื่อ 10 %) จากความเข้มข้น 1 × 10⁶ เซลล์/mL จะได้ 675,840 ÷ 1,000,000 ≈ 0.68 mL แล้วเติมอาหารเลี้ยงเซลล์จนได้ปริมาตรสุดท้าย
การคำนวณนี้เหมือนกับ C1V1 = C2V2 หรือไม่?
ใช่ เครื่องคำนวณนี้แก้สมการ C1 × V1 = C2 × V2 สำหรับเซลล์: C1 คือความเข้มข้นของสารตั้งต้น C2 คือความเข้มข้นของส่วนผสมสำหรับเพาะเซลล์ (เซลล์ต่อหลุม ÷ ปริมาตรต่อหลุม) V2 คือปริมาตรรวม และ V1 คือปริมาตรสารแขวนลอยที่ต้องดูดมา
หลุมของเพลต 96 หลุมมีพื้นที่ผิวเท่าไร?
ประมาณ 0.32 cm² สำหรับหลุมก้นแบนมาตรฐาน (ทั้ง Thermo Fisher และ Corning ระบุ 0.32 cm²) ส่วนเพลต 96 หลุมแบบครึ่งพื้นที่ (half-area) มีประมาณ 0.16 cm²
เครื่องคำนวณนี้ใช้ฟรีหรือไม่?
ใช่ เครื่องคำนวณทำงานในเบราว์เซอร์ของคุณและไม่ส่งข้อมูลใด ๆ ออกไป ส่วน SlideScope แอปกล้องจุลทรรศน์บนเดสก์ท็อปจากทีมเดียวกัน เป็นแอปแบบชำระเงินที่มีคลังภาพตัวอย่างฟรี (ใช้ได้ทุกเครื่องมือ) และต้องสมัครสมาชิกสำหรับภาพของคุณเอง
แหล่งอ้างอิง
ผลลัพธ์เป็นค่าทางทฤษฎีหรือการคำนวณทางคณิตศาสตร์ ตรวจสอบกับเอกสารของเครื่องมือของคุณก่อนนำไปใช้กับงานทางคลินิกหรืองานที่มีการกำกับดูแล
วัดบนภาพจริงของคุณ
SlideScope เปิดไฟล์จากกล้องจุลทรรศน์และเครื่องสแกนสไลด์ได้ 34 รูปแบบ รวมถึง CZI, ND2, SVS และ LIF พร้อมการปรับเทียบของไฟล์เอง ความยาว พื้นที่ จำนวนเซลล์ และแถบมาตราส่วนจึงออกมาเป็น µm โดยไม่ต้องตั้งค่าใด ๆ ลองใช้ทุกเครื่องมือฟรีกับภาพตัวอย่างในตัว ส่วนการเปิดภาพของคุณเองต้องใช้การสมัครสมาชิก ตัดสินใจแล้ว? สมัครสมาชิกเลย