파종 계산 방법
웰당 세포 수 = 밀도 × 면적 · 현탁액 = 웰당 세포 수 × 웰 수 ÷ 농도 · 배지 = 웰당 부피 × 웰 수 − 현탁액
계산 예: 1 × 10⁶ cells/mL 현탁액으로 96웰 플레이트에 20,000 cells/cm²로 파종하고, 웰당 100 µL, 여유분 10 %를 둡니다. 웰 하나는 0.32 cm²이므로 웰당 6,400개입니다. 96웰 × 1.1 = 105.6웰 분량: 675,840개로, 현탁액 0.676 mL에 해당합니다. 총 부피는 10.56 mL이므로 배지 9.88 mL를 더해 섞은 다음 각 웰에 100 µL씩 넣습니다.
현탁액만으로도 최종 부피를 넘는다면 그 밀도에 비해 원액이 너무 묽은 것입니다. 세포를 원심분리하고 더 적은 배지에 재현탁한 다음 다시 계수하세요.
배양 면적과 일반적인 부피
| 용기 | 배양 면적 | 배지 | 일반적인 파종량(HeLa) |
|---|---|---|---|
| 6웰 플레이트 | 9.6 cm² | 1–3 mL | 웰당 0.3 × 10⁶ |
| 12웰 플레이트 | 3.5 cm² | 1–2 mL | 웰당 0.1 × 10⁶ |
| 24웰 플레이트 | 1.9 cm² | 0.5–1 mL | 웰당 0.05 × 10⁶ |
| 48웰 플레이트 | 1.1 cm² | 0.2–0.4 mL | 웰당 0.03 × 10⁶ |
| 96웰 플레이트 | 0.32 cm² | 0.1–0.2 mL | 웰당 0.01 × 10⁶ |
| 384웰 플레이트 | 0.084 cm² | ~0.08 mL | 웰당 0.0018 × 10⁶ |
| 35 / 60 / 100 mm 디시 | 8.8 / 21.5 / 56.7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| T-25 / T-75 / T-175 플라스크 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
값은 Thermo Fisher의 세포 배양 참고표(Nunc 용기)에서 가져왔습니다. 다른 브랜드는 조금씩 다르며, 예를 들어 Corning 6웰은 9.5 cm²입니다. 위의 면적 입력란은 수정할 수 있습니다. 적절한 밀도는 세포주와 배양이 컨플루언스에 도달하기를 원하는 시점에 따라 달라지므로 HeLa 수치는 출발점으로만 참고하세요.
고르게 파종하기
- 파종 직전에 혈구계나 자동 세포 계수기로 계수하고, 생세포 농도를 사용하세요.
- 혼합액이 현탁 상태를 유지하게 하세요. 세포는 몇 분 안에 가라앉으므로 줄을 바꿀 때마다 뒤집거나 피펫팅하세요.
- 가장자리에 세포가 몰리는 현상을 줄이려면, 막 파종한 플레이트를 인큐베이터에 넣기 전에 실온에서 15–30분간 평평하게 두세요.
- 이미징한다면 웰마다 몇 개 시야를 촬영하고 이미지에서 밀도를 확인하세요. 교정된 이미지라면 계수 결과에서 mm²당 세포 수를 바로 얻을 수 있습니다.
질문
웰당 세포 수는 어떻게 계산하나요?
cm²당 세포 수로 나타낸 파종 밀도에 웰 하나의 배양 면적을 곱합니다. 96웰 플레이트의 웰은 약 0.32 cm²이므로 20,000 cells/cm²는 웰당 6,400개입니다.
세포 현탁액은 얼마나 필요한가요?
필요한 총 세포 수 ÷ 세포 농도입니다. 1 × 10⁶ cells/mL 현탁액으로 6,400개씩 96웰(여유분 10 % 포함)을 채운다면 675,840 ÷ 1,000,000 ≈ 0.68 mL이며, 여기에 배지를 더해 최종 부피를 맞춥니다.
C1V1 = C2V2와 같은 계산인가요?
네. 이 계산기는 세포에 대해 C1 × V1 = C2 × V2를 풉니다. C1은 원액 농도, C2는 파종 혼합액의 농도(웰당 세포 수 ÷ 웰당 부피), V2는 총 부피, V1은 취할 현탁액입니다.
96웰 플레이트 웰의 표면적은 얼마인가요?
표준 평저 웰은 약 0.32 cm²입니다(Thermo Fisher와 Corning 모두 0.32 cm²로 표기). 하프 에어리어 96웰 플레이트는 약 0.16 cm²입니다.
이 계산기는 무료인가요?
네. 브라우저에서 실행되며 어디에도 데이터를 보내지 않습니다. 같은 팀이 만든 데스크톱 현미경 앱 SlideScope는 무료 샘플 라이브러리(모든 도구 포함)가 있는 유료 앱이며, 내 이미지를 열려면 구독이 필요합니다.
출처
결과는 이론값 또는 산술 계산값입니다. 임상 또는 규제 대상 업무에 사용하기 전에 장비 문서와 대조해 확인하세요.
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