Cultivo celular
Calculadora de siembra celular
Elige la placa o el frasco, introduce la concentración de células y la densidad de siembra, y obtén el número de células por pocillo, cuánta suspensión celular y cuánto medio mezclar, y qué va en cada pocillo. Las áreas de crecimiento vienen rellenadas para los recipientes habituales y se pueden editar, porque varían un poco entre fabricantes.
Cómo funciona el cálculo de siembra
células por pocillo = densidad × área · suspensión = células por pocillo × pocillos ÷ concentración · medio = volumen por pocillo × pocillos − suspensión
Ejemplo resuelto: sembrar una placa de 96 pocillos a 20 000 células/cm² a partir de una suspensión de 1 × 10⁶ células/mL, con 100 µL por pocillo y un 10 % extra. Cada pocillo mide 0,32 cm², así que son 6400 células por pocillo. 96 pocillos × 1,1 = el equivalente a 105,6 pocillos: 675 840 células, es decir, 0,676 mL de suspensión. El volumen total es de 10,56 mL, así que añade 9,88 mL de medio, mezcla y pon 100 µL en cada pocillo.
Si la suspensión por sí sola supera el volumen final, el stock está demasiado diluido para esa densidad: centrifuga las células, resuspéndelas en menos medio y vuelve a contarlas.
Áreas de crecimiento y volúmenes habituales
| Recipiente | Área de crecimiento | Medio | Siembra habitual (HeLa) |
|---|---|---|---|
| Placa de 6 pocillos | 9,6 cm² | 1–3 mL | 0,3 × 10⁶ por pocillo |
| Placa de 12 pocillos | 3,5 cm² | 1–2 mL | 0,1 × 10⁶ por pocillo |
| Placa de 24 pocillos | 1,9 cm² | 0,5–1 mL | 0,05 × 10⁶ por pocillo |
| Placa de 48 pocillos | 1,1 cm² | 0,2–0,4 mL | 0,03 × 10⁶ por pocillo |
| Placa de 96 pocillos | 0,32 cm² | 0,1–0,2 mL | 0,01 × 10⁶ por pocillo |
| Placa de 384 pocillos | 0,084 cm² | ~0,08 mL | 0,0018 × 10⁶ por pocillo |
| Placa de Petri de 35 / 60 / 100 mm | 8,8 / 21,5 / 56,7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| Frasco T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Valores de la tabla de referencia de cultivo celular de Thermo Fisher (recipientes Nunc). Otras marcas varían ligeramente; por ejemplo, un pocillo de placa de 6 de Corning mide 9,5 cm²; el campo de área de arriba se puede editar. La densidad adecuada depende de la línea celular y de cuándo quieras que el cultivo llegue a confluencia, así que toma las cifras de HeLa como punto de partida.
Sembrar de forma uniforme
- Cuenta con un hemocitómetro o un contador automático justo antes de sembrar, y usa la concentración de células vivas.
- Mantén la mezcla en suspensión: inviértela o pipetéala entre filas, porque las células sedimentan en cuestión de minutos.
- Deja reposar en horizontal a temperatura ambiente una placa recién sembrada durante 15–30 minutos antes de meterla en el incubador, para reducir la acumulación en los bordes.
- Si vas a obtener imágenes, fotografía unos cuantos campos por pocillo y comprueba la densidad en las imágenes: con una imagen calibrada, las células por mm² salen directamente de un recuento.
Preguntas
¿Cómo calculo las células por pocillo?
Multiplica la densidad de siembra en células por cm² por el área de crecimiento de un pocillo. Un pocillo de una placa de 96 mide unos 0,32 cm², así que 20 000 células/cm² equivalen a 6400 células por pocillo.
¿Cuánta suspensión celular necesito?
Células totales necesarias ÷ concentración celular. Para 96 pocillos de 6400 células (más un 10 % extra) a partir de 1 × 10⁶ células/mL, son 675 840 ÷ 1 000 000 ≈ 0,68 mL, completados con medio hasta el volumen final.
¿Es lo mismo que C1V1 = C2V2?
Sí. La calculadora resuelve C1 × V1 = C2 × V2 para células: C1 es la concentración de tu stock, C2 la concentración de la mezcla de siembra (células por pocillo ÷ volumen por pocillo), V2 el volumen total y V1 la suspensión que hay que tomar.
¿Cuál es el área de un pocillo de una placa de 96?
Unos 0,32 cm² para un pocillo estándar de fondo plano (tanto Thermo Fisher como Corning indican 0,32 cm²); las placas de 96 pocillos de medio área tienen unos 0,16 cm².
¿Esta calculadora es gratuita?
Sí. Funciona en tu navegador y no envía nada a ninguna parte. SlideScope, la aplicación de microscopía de escritorio creada por el mismo equipo, es una aplicación de pago con una biblioteca de muestras gratuita (todas las herramientas) y una suscripción para tus propias imágenes.
Fuentes
Los resultados son teóricos o aritméticos; compruébalos con la documentación de tu instrumento antes de basarte en ellos para trabajo clínico o regulado.
Mide en tus imágenes reales
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