Kultur sel
Kalkulator penyemaian sel
Pilih pelat atau flask, masukkan konsentrasi sel dan kepadatan penanaman, lalu dapatkan jumlah sel per sumur, berapa banyak suspensi sel dan medium yang perlu dicampur, serta apa yang dimasukkan ke setiap sumur. Luas area tumbuh sudah terisi untuk wadah yang umum dan tetap dapat diubah, karena nilainya sedikit berbeda antarprodusen.
Cara kerja perhitungan penanaman
sel per sumur = kepadatan × luas · suspensi = sel per sumur × jumlah sumur ÷ konsentrasi · medium = volume per sumur × jumlah sumur − suspensi
Contoh perhitungan: menanam pelat 96 sumur dengan kepadatan 20.000 sel/cm² dari suspensi 1 × 10⁶ sel/mL, 100 µL per sumur, dengan ekstra 10 %. Setiap sumur seluas 0,32 cm², jadi 6.400 sel per sumur. 96 sumur × 1,1 = setara 105,6 sumur: 675.840 sel, yaitu 0,676 mL suspensi. Volume totalnya 10,56 mL, jadi tambahkan 9,88 mL medium, campur, lalu masukkan 100 µL ke setiap sumur.
Jika volume suspensinya saja sudah melebihi volume akhir, stok terlalu encer untuk kepadatan tersebut: sentrifugasi sel, resuspensikan dalam medium yang lebih sedikit, lalu hitung ulang.
Luas area tumbuh dan volume umum
| Wadah | Luas area tumbuh | Medium | Penanaman umum (HeLa) |
|---|---|---|---|
| Pelat 6 sumur | 9,6 cm² | 1–3 mL | 0,3 × 10⁶ per sumur |
| Pelat 12 sumur | 3,5 cm² | 1–2 mL | 0,1 × 10⁶ per sumur |
| Pelat 24 sumur | 1,9 cm² | 0,5–1 mL | 0,05 × 10⁶ per sumur |
| Pelat 48 sumur | 1,1 cm² | 0,2–0,4 mL | 0,03 × 10⁶ per sumur |
| Pelat 96 sumur | 0,32 cm² | 0,1–0,2 mL | 0,01 × 10⁶ per sumur |
| Pelat 384 sumur | 0,084 cm² | ~0,08 mL | 0,0018 × 10⁶ per sumur |
| Cawan 35 / 60 / 100 mm | 8,8 / 21,5 / 56,7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| Flask T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Nilai dari tabel referensi kultur sel Thermo Fisher (wadah Nunc). Merek lain sedikit berbeda, misalnya pelat 6 sumur Corning seluas 9,5 cm²; kolom luas di atas dapat diubah. Kepadatan yang tepat bergantung pada lini sel dan kapan Anda ingin kultur mencapai konfluensi, jadi anggap angka HeLa sebagai titik awal.
Menanam secara merata
- Hitung dengan hemositometer atau penghitung otomatis tepat sebelum penanaman, dan gunakan konsentrasi sel hidup.
- Jaga campuran tetap tersuspensi: balikkan atau pipet di antara baris, karena sel mengendap dalam hitungan menit.
- Biarkan pelat yang baru ditanami dalam posisi datar pada suhu ruang selama 15–30 menit sebelum dimasukkan ke inkubator untuk mengurangi penumpukan sel di tepi.
- Untuk pencitraan, ambil citra beberapa bidang per sumur dan periksa kepadatannya pada citra: dengan citra terkalibrasi, jumlah sel per mm² langsung diperoleh dari hasil hitungan.
Pertanyaan
Bagaimana cara menghitung sel per sumur?
Kalikan kepadatan penanaman dalam sel per cm² dengan luas area tumbuh satu sumur. Satu sumur pelat 96 sumur sekitar 0,32 cm², jadi 20.000 sel/cm² setara dengan 6.400 sel per sumur.
Berapa banyak suspensi sel yang saya perlukan?
Total sel yang diperlukan ÷ konsentrasi sel. Untuk 96 sumur berisi 6.400 sel (ditambah ekstra 10 %) dari 1 × 10⁶ sel/mL, hasilnya 675.840 ÷ 1.000.000 ≈ 0,68 mL, lalu dicukupkan dengan medium hingga volume akhir.
Apakah ini sama dengan C1V1 = C2V2?
Ya. Kalkulator ini menyelesaikan C1 × V1 = C2 × V2 untuk sel: C1 adalah konsentrasi stok Anda, C2 konsentrasi campuran penanaman (sel per sumur ÷ volume per sumur), V2 volume total, dan V1 suspensi yang diambil.
Berapa luas permukaan satu sumur pelat 96 sumur?
Sekitar 0,32 cm² untuk sumur standar berdasar datar (Thermo Fisher dan Corning sama-sama mencantumkan 0,32 cm²); pelat 96 sumur half-area sekitar 0,16 cm².
Apakah kalkulator ini gratis?
Ya. Kalkulator ini berjalan di browser Anda dan tidak mengirim apa pun ke mana pun. SlideScope, aplikasi mikroskopi desktop buatan tim yang sama, adalah aplikasi berbayar dengan pustaka sampel gratis (semua alat) dan langganan untuk citra Anda sendiri.
Sumber
Hasilnya bersifat teoretis atau aritmetis; periksa terhadap dokumentasi instrumen Anda sebelum mengandalkannya untuk pekerjaan klinis atau yang diatur regulasi.
Ukur pada citra Anda yang sebenarnya
SlideScope membuka 34 format mikroskop dan pemindai slide, di antaranya CZI, ND2, SVS, dan LIF, dengan kalibrasinya sendiri, sehingga panjang, luas, jumlah sel, dan skala batang langsung keluar dalam µm tanpa pengaturan apa pun. Coba semua alat secara gratis pada sampel bawaan; membuka citra Anda sendiri memerlukan langganan. Sudah memutuskan? Berlangganan sekarang.