Cultura celular
Calculadora de sementeira de células
Escolha a placa ou o frasco, introduza a concentração celular e a densidade de sementeira, e obtenha o número de células por poço, quanta suspensão celular e meio misturar e o que vai para cada poço. As áreas de crescimento vêm preenchidas para os recipientes mais comuns e continuam editáveis, porque variam ligeiramente entre fabricantes.
Como funciona o cálculo da sementeira
células por poço = densidade × área · suspensão = células por poço × poços ÷ concentração · meio = volume por poço × poços − suspensão
Exemplo resolvido: semear uma placa de 96 poços a 20 000 células/cm² a partir de uma suspensão de 1 × 10⁶ células/mL, com 100 µL por poço e 10 % de margem. Cada poço tem 0,32 cm², portanto 6400 células por poço. 96 poços × 1,1 = o equivalente a 105,6 poços: 675 840 células, ou seja, 0,676 mL de suspensão. O volume total é 10,56 mL, por isso adicione 9,88 mL de meio, misture e coloque 100 µL em cada poço.
Se só a suspensão já ultrapassar o volume final, o stock está demasiado diluído para essa densidade: centrifugue as células, ressuspenda-as em menos meio e volte a contar.
Áreas de crescimento e volumes típicos
| Recipiente | Área de crescimento | Meio | Sementeira típica (HeLa) |
|---|---|---|---|
| Placa de 6 poços | 9,6 cm² | 1–3 mL | 0,3 × 10⁶ por poço |
| Placa de 12 poços | 3,5 cm² | 1–2 mL | 0,1 × 10⁶ por poço |
| Placa de 24 poços | 1,9 cm² | 0,5–1 mL | 0,05 × 10⁶ por poço |
| Placa de 48 poços | 1,1 cm² | 0,2–0,4 mL | 0,03 × 10⁶ por poço |
| Placa de 96 poços | 0,32 cm² | 0,1–0,2 mL | 0,01 × 10⁶ por poço |
| Placa de 384 poços | 0,084 cm² | ~0,08 mL | 0,0018 × 10⁶ por poço |
| Caixa de 35 / 60 / 100 mm | 8,8 / 21,5 / 56,7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| Frasco T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Valores da tabela de referência de cultura celular da Thermo Fisher (recipientes Nunc). Outras marcas diferem ligeiramente; por exemplo, um poço de uma placa de 6 poços Corning tem 9,5 cm². O campo de área acima é editável. A densidade adequada depende da linha celular e de quando quer que a cultura atinja a confluência, por isso trate os números da HeLa como ponto de partida.
Semear de forma uniforme
- Conte com um hemocitómetro ou um contador automático imediatamente antes de semear e use a concentração de células vivas.
- Mantenha a mistura em suspensão: inverta-a ou pipete-a entre filas, porque as células assentam em poucos minutos.
- Deixe uma placa acabada de semear pousada na horizontal, à temperatura ambiente, durante 15–30 minutos antes de a colocar na incubadora, para reduzir a acumulação nas bordas.
- Para imagiologia, adquira alguns campos por poço e verifique a densidade nas imagens: com uma imagem calibrada, as células por mm² obtêm-se diretamente de uma contagem.
Perguntas
Como calculo as células por poço?
Multiplique a densidade de sementeira em células por cm² pela área de crescimento de um poço. Um poço de uma placa de 96 poços tem cerca de 0,32 cm², por isso 20 000 células/cm² correspondem a 6400 células por poço.
De quanta suspensão celular preciso?
Total de células necessárias ÷ concentração celular. Para 96 poços de 6400 células (mais 10 % de margem) a partir de 1 × 10⁶ células/mL, isso dá 675 840 ÷ 1 000 000 ≈ 0,68 mL, completados com meio até ao volume final.
É o mesmo que C1V1 = C2V2?
Sim. A calculadora resolve C1 × V1 = C2 × V2 para células: C1 é a concentração do seu stock, C2 a concentração da mistura de sementeira (células por poço ÷ volume por poço), V2 o volume total e V1 a suspensão a retirar.
Qual é a área de superfície de um poço de uma placa de 96 poços?
Cerca de 0,32 cm² para um poço normal de fundo plano (a Thermo Fisher e a Corning indicam ambas 0,32 cm²); as placas de 96 poços de meia área têm cerca de 0,16 cm².
Esta calculadora é gratuita?
Sim. Funciona no seu navegador e não envia nada para lado nenhum. O SlideScope, a aplicação de microscopia para computador da mesma equipa, é uma aplicação paga com uma biblioteca de amostras gratuita (todas as ferramentas) e uma subscrição para as suas próprias imagens.
Fontes
Os resultados são teóricos ou aritméticos; confronte-os com a documentação do seu instrumento antes de confiar neles para trabalho clínico ou regulamentado.
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