Coltura cellulare
Calcolatore di semina cellulare
Scegli la piastra o la fiasca, inserisci la concentrazione cellulare e la densità di semina, e ottieni il numero di cellule per pozzetto, quanta sospensione cellulare e quanto terreno miscelare e che cosa mettere in ogni pozzetto. Le superfici di crescita sono già compilate per i contenitori più comuni e restano modificabili, perché variano leggermente da un produttore all’altro.
Come funziona il calcolo della semina
cellule per pozzetto = densità × superficie · sospensione = cellule per pozzetto × pozzetti ÷ concentrazione · terreno = volume per pozzetto × pozzetti − sospensione
Esempio svolto: semina di una piastra da 96 pozzetti a 20.000 cellule/cm² da una sospensione di 1 × 10⁶ cellule/mL, 100 µL per pozzetto, con il 10 % in più. Ogni pozzetto misura 0,32 cm², quindi 6.400 cellule per pozzetto. 96 pozzetti × 1,1 = l’equivalente di 105,6 pozzetti: 675.840 cellule, cioè 0,676 mL di sospensione. Il volume totale è 10,56 mL, quindi aggiungi 9,88 mL di terreno, mescola e metti 100 µL in ogni pozzetto.
Se la sola sospensione supera il volume finale, lo stock è troppo diluito per quella densità: centrifuga le cellule, risospendile in meno terreno e conta di nuovo.
Superfici di crescita e volumi tipici
| Contenitore | Superficie di crescita | Terreno | Semina tipica (HeLa) |
|---|---|---|---|
| Piastra da 6 pozzetti | 9,6 cm² | 1–3 mL | 0,3 × 10⁶ per pozzetto |
| Piastra da 12 pozzetti | 3,5 cm² | 1–2 mL | 0,1 × 10⁶ per pozzetto |
| Piastra da 24 pozzetti | 1,9 cm² | 0,5–1 mL | 0,05 × 10⁶ per pozzetto |
| Piastra da 48 pozzetti | 1,1 cm² | 0,2–0,4 mL | 0,03 × 10⁶ per pozzetto |
| Piastra da 96 pozzetti | 0,32 cm² | 0,1–0,2 mL | 0,01 × 10⁶ per pozzetto |
| Piastra da 384 pozzetti | 0,084 cm² | ~0,08 mL | 0,0018 × 10⁶ per pozzetto |
| Piastra Petri da 35 / 60 / 100 mm | 8,8 / 21,5 / 56,7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| Fiasca T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Valori dalla tabella di riferimento per la coltura cellulare di Thermo Fisher (contenitori Nunc). Altri marchi differiscono leggermente: per esempio un pozzetto Corning da 6 misura 9,5 cm²; il campo della superficie qui sopra è modificabile. La densità giusta dipende dalla linea cellulare e da quando vuoi che la coltura arrivi a confluenza, quindi considera i valori per HeLa come un punto di partenza.
Seminare in modo uniforme
- Conta con un emocitometro o un contatore automatico subito prima della semina, e usa la concentrazione di cellule vive.
- Mantieni la miscela in sospensione: capovolgila o pipettala tra una fila e l’altra, perché le cellule sedimentano in pochi minuti.
- Lascia la piastra appena seminata in piano a temperatura ambiente per 15–30 minuti prima di metterla nell’incubatore, per ridurre l’addensamento ai bordi.
- Per l’imaging, acquisisci alcuni campi per pozzetto e verifica la densità sulle immagini: con un’immagine calibrata, le cellule per mm² si ottengono direttamente da un conteggio.
Domande
Come si calcolano le cellule per pozzetto?
Moltiplica la densità di semina in cellule per cm² per la superficie di crescita di un pozzetto. Un pozzetto di una piastra da 96 misura circa 0,32 cm², quindi 20.000 cellule/cm² corrispondono a 6.400 cellule per pozzetto.
Quanta sospensione cellulare mi serve?
Cellule totali necessarie ÷ concentrazione cellulare. Per 96 pozzetti da 6.400 cellule (più il 10 % in più) da 1 × 10⁶ cellule/mL, si ottiene 675.840 ÷ 1.000.000 ≈ 0,68 mL, da portare al volume finale con il terreno.
È lo stesso di C1V1 = C2V2?
Sì. Il calcolatore risolve C1 × V1 = C2 × V2 per le cellule: C1 è la concentrazione dello stock, C2 la concentrazione della miscela di semina (cellule per pozzetto ÷ volume per pozzetto), V2 il volume totale e V1 la sospensione da prelevare.
Qual è la superficie di un pozzetto di una piastra da 96?
Circa 0,32 cm² per un pozzetto standard a fondo piatto (sia Thermo Fisher sia Corning indicano 0,32 cm²); le piastre da 96 pozzetti half-area misurano circa 0,16 cm².
Questo calcolatore è gratuito?
Sì. Funziona nel tuo browser e non invia nulla da nessuna parte. SlideScope, l’app desktop per microscopia creata dallo stesso team, è un’app a pagamento con una libreria di campioni gratuita (tutti gli strumenti) e un abbonamento per le tue immagini.
Fonti
I risultati sono teorici o aritmetici; confrontali con la documentazione del tuo strumento prima di farvi affidamento per attività cliniche o regolamentate.
Misura sulle tue immagini reali
SlideScope apre 34 formati di microscopi e scanner per vetrini, tra cui CZI, ND2, SVS e LIF, con la loro calibrazione, così lunghezze, aree, conteggi di cellule e barre di scala risultano in µm senza dover impostare nulla. Prova gratis tutti gli strumenti sui campioni inclusi; per aprire le tue immagini serve un abbonamento. Hai già deciso? Abbonati ora.