Celkweek
Calculator voor celzaaiing
Kies de plaat of fles, vul je celconcentratie en de zaaidichtheid in, en je krijgt het aantal cellen per putje, hoeveel celsuspensie en medium je moet mengen, en wat er in elk putje gaat. De groeioppervlakken zijn voor gangbare kweekvaten al ingevuld en blijven aanpasbaar, omdat ze per fabrikant iets verschillen.
Zo werkt de zaaiberekening
cellen per putje = dichtheid × oppervlak · suspensie = cellen per putje × putjes ÷ concentratie · medium = volume per putje × putjes − suspensie
Uitgewerkt voorbeeld: je zaait een 96-wellsplaat met 20.000 cellen/cm² uit een suspensie van 1 × 10⁶ cellen/mL, 100 µL per putje, met 10 % extra. Elk putje is 0,32 cm², dus 6.400 cellen per putje. 96 putjes × 1,1 = genoeg voor 105,6 putjes: 675.840 cellen, oftewel 0,676 mL suspensie. Het totale volume is 10,56 mL, dus voeg 9,88 mL medium toe, meng, en doe 100 µL in elk putje.
Is de suspensie alleen al meer dan het eindvolume, dan is de stock te verdund voor die dichtheid: centrifugeer de cellen af, resuspendeer ze in minder medium en tel opnieuw.
Groeioppervlakken en gebruikelijke volumes
| Kweekvat | Groeioppervlak | Medium | Gebruikelijke zaaiing (HeLa) |
|---|---|---|---|
| 6-wellsplaat | 9,6 cm² | 1–3 mL | 0,3 × 10⁶ per putje |
| 12-wellsplaat | 3,5 cm² | 1–2 mL | 0,1 × 10⁶ per putje |
| 24-wellsplaat | 1,9 cm² | 0,5–1 mL | 0,05 × 10⁶ per putje |
| 48-wellsplaat | 1,1 cm² | 0,2–0,4 mL | 0,03 × 10⁶ per putje |
| 96-wellsplaat | 0,32 cm² | 0,1–0,2 mL | 0,01 × 10⁶ per putje |
| 384-wellsplaat | 0,084 cm² | ~0,08 mL | 0,0018 × 10⁶ per putje |
| Schaal van 35 / 60 / 100 mm | 8,8 / 21,5 / 56,7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| T-25- / T-75- / T-175-fles | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Waarden uit de referentietabel voor celkweek van Thermo Fisher (Nunc-kweekvaten). Andere merken wijken iets af; een 6-wellsplaat van Corning heeft bijvoorbeeld 9,5 cm² per putje. Het oppervlakveld hierboven kun je aanpassen. De juiste dichtheid hangt af van de cellijn en van wanneer de kweek confluent moet zijn, dus zie de HeLa-getallen als startpunt.
Gelijkmatig zaaien
- Tel vlak voor het zaaien met een hemocytometer of een automatische celteller, en gebruik de concentratie levende cellen.
- Houd het mengsel in suspensie: keer het om of pipetteer het op en neer tussen de rijen, want cellen zakken binnen enkele minuten uit.
- Laat een vers gezaaide plaat 15–30 minuten plat op kamertemperatuur staan voordat hij de incubator in gaat, zodat de cellen zich minder aan de randen ophopen.
- Voor beeldvorming: maak beelden van een paar velden per putje en controleer de dichtheid op de beelden. Met een gekalibreerd beeld volgen de cellen per mm² direct uit een telling.
Vragen
Hoe bereken ik het aantal cellen per putje?
Vermenigvuldig de zaaidichtheid in cellen per cm² met het groeioppervlak van één putje. Een putje van een 96-wellsplaat is ongeveer 0,32 cm², dus 20.000 cellen/cm² is 6.400 cellen per putje.
Hoeveel celsuspensie heb ik nodig?
Totaal benodigde cellen ÷ celconcentratie. Voor 96 putjes van 6.400 cellen (plus 10 % extra) uit 1 × 10⁶ cellen/mL is dat 675.840 ÷ 1.000.000 ≈ 0,68 mL, aangevuld met medium tot het eindvolume.
Is dit hetzelfde als C1V1 = C2V2?
Ja. De calculator lost C1 × V1 = C2 × V2 op voor cellen: C1 is de concentratie van je stock, C2 de concentratie van het zaaimengsel (cellen per putje ÷ volume per putje), V2 het totale volume en V1 de af te nemen suspensie.
Wat is het oppervlak van een putje van een 96-wellsplaat?
Ongeveer 0,32 cm² voor een standaardputje met vlakke bodem (Thermo Fisher en Corning noemen allebei 0,32 cm²); 96-wellsplaten met half oppervlak zitten op ongeveer 0,16 cm².
Is deze calculator gratis?
Ja. Hij draait in je browser en stuurt nergens iets naartoe. SlideScope, de desktopapp voor microscopie van hetzelfde team, is een betaalde app met een gratis voorbeeldbibliotheek (elke tool) en een abonnement voor je eigen beelden.
Bronnen
De resultaten zijn theoretisch of rekenkundig; controleer ze aan de hand van de documentatie van je instrument voordat je erop vertrouwt voor klinisch of gereguleerd werk.
Meet op je echte beelden
SlideScope opent 34 formaten van microscopen en slidescanners, waaronder CZI, ND2, SVS en LIF, met hun eigen kalibratie, zodat lengtes, oppervlakken, celtellingen en schaalbalken in µm uitkomen zonder dat je iets hoeft in te stellen. Probeer elke tool gratis op de ingebouwde voorbeelden; voor het openen van je eigen beelden heb je een abonnement nodig. Al besloten? Nu abonneren.