Buněčné kultury
Kalkulačka pro výsev buněk
Vyberte destičku nebo lahev, zadejte koncentraci buněk a hustotu výsevu a zjistíte počet buněk na jamku, kolik buněčné suspenze a média smíchat a co dát do každé jamky. Růstové plochy jsou pro běžné nádoby předvyplněné a dají se upravit, protože se mezi výrobci mírně liší.
Jak výpočet výsevu funguje
buňky na jamku = hustota × plocha · suspenze = buňky na jamku × jamky ÷ koncentrace · médium = objem na jamku × jamky − suspenze
Řešený příklad: výsev do 96jamkové destičky při 20 000 buněk/cm² ze suspenze 1 × 10⁶ buněk/ml, 100 µl na jamku, s 10 % navíc. Každá jamka má 0,32 cm², tedy 6 400 buněk na jamku. 96 jamek × 1,1 = objem pro 105,6 jamky: 675 840 buněk, což je 0,676 ml suspenze. Celkový objem je 10,56 ml, takže přidejte 9,88 ml média, promíchejte a do každé jamky dejte 100 µl.
Pokud je samotná suspenze objemnější než výsledný objem, je zásobní suspenze pro tuto hustotu příliš zředěná: buňky stočte, resuspendujte v menším objemu média a spočítejte znovu.
Růstové plochy a typické objemy
| Nádoba | Růstová plocha | Médium | Typický výsev (HeLa) |
|---|---|---|---|
| 6jamková destička | 9,6 cm² | 1–3 ml | 0,3 × 10⁶ na jamku |
| 12jamková destička | 3,5 cm² | 1–2 ml | 0,1 × 10⁶ na jamku |
| 24jamková destička | 1,9 cm² | 0,5–1 ml | 0,05 × 10⁶ na jamku |
| 48jamková destička | 1,1 cm² | 0,2–0,4 ml | 0,03 × 10⁶ na jamku |
| 96jamková destička | 0,32 cm² | 0,1–0,2 ml | 0,01 × 10⁶ na jamku |
| 384jamková destička | 0,084 cm² | ~0,08 ml | 0,0018 × 10⁶ na jamku |
| Miska 35 / 60 / 100 mm | 8,8 / 21,5 / 56,7 cm² | 2 / 5 / 12 ml | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| Lahev T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 ml | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Hodnoty pocházejí z referenční tabulky pro buněčné kultury Thermo Fisher (nádoby Nunc). Jiné značky se mírně liší, například 6jamková destička Corning má 9,5 cm²; pole s plochou výše lze upravit. Správná hustota závisí na buněčné linii a na tom, kdy má kultura dosáhnout konfluence, takže čísla pro HeLa berte jako výchozí bod.
Rovnoměrný výsev
- Buňky spočítejte hemocytometrem nebo automatickým počítačem buněk těsně před výsevem a použijte koncentraci živých buněk.
- Udržujte směs v suspenzi: mezi řadami ji převracejte nebo propipetujte, protože buňky sedimentují během několika minut.
- Čerstvě vysetou destičku nechte 15–30 minut ležet naplocho při pokojové teplotě, než ji dáte do inkubátoru; omezíte tak nahromadění buněk u okrajů.
- Pro mikroskopii nasnímejte v každé jamce několik polí a hustotu zkontrolujte na snímcích: z kalibrovaného snímku získáte počet buněk na mm² přímo spočítáním.
Otázky
Jak vypočítat počet buněk na jamku?
Vynásobte hustotu výsevu v buňkách na cm² růstovou plochou jedné jamky. Jamka 96jamkové destičky má asi 0,32 cm², takže 20 000 buněk/cm² odpovídá 6 400 buňkám na jamku.
Kolik buněčné suspenze potřebuji?
Celkový potřebný počet buněk ÷ koncentrace buněk. Pro 96 jamek po 6 400 buňkách (plus 10 % navíc) ze suspenze 1 × 10⁶ buněk/ml to je 675 840 ÷ 1 000 000 ≈ 0,68 ml, doplněno médiem na výsledný objem.
Je to totéž jako C1V1 = C2V2?
Ano. Kalkulačka řeší C1 × V1 = C2 × V2 pro buňky: C1 je koncentrace vaší zásobní suspenze, C2 koncentrace výsevní směsi (buňky na jamku ÷ objem na jamku), V2 celkový objem a V1 objem suspenze, který odeberete.
Jaká je plocha jamky 96jamkové destičky?
Asi 0,32 cm² u standardní jamky s plochým dnem (Thermo Fisher i Corning uvádějí 0,32 cm²); 96jamkové destičky s poloviční plochou mají asi 0,16 cm².
Je tato kalkulačka zdarma?
Ano. Běží ve vašem prohlížeči a nikam nic neposílá. SlideScope, desktopová aplikace pro mikroskopii od stejného týmu, je placená aplikace s bezplatnou knihovnou ukázek (všechny nástroje) a předplatným pro vlastní snímky.
Zdroje
Výsledky jsou teoretické nebo aritmetické; než se na ně budete spoléhat při klinické nebo regulované práci, ověřte je podle dokumentace svého přístroje.
Měřte na svých skutečných snímcích
SlideScope otevře 34 formátů mikroskopů a skenerů preparátů, mimo jiné CZI, ND2, SVS a LIF, s jejich vlastní kalibrací, takže délky, plochy, počty buněk i měřítka vycházejí v µm bez jakéhokoli nastavování. Vyzkoušejte všechny nástroje zdarma na vestavěných ukázkách; pro otevírání vlastních snímků potřebujete předplatné. Už máte jasno? Předplaťte si ho.