زراعة الخلايا
حاسبة بذر الخلايا
اختر الصفيحة أو القارورة، وأدخل تركيز الخلايا وكثافة الزرع، واحصل على عدد الخلايا لكل بئر، وكمية المعلّق الخلوي والوسط اللازم خلطهما، وما يوضع في كل بئر. مساحات النمو معبّأة مسبقًا للأوعية الشائعة وتبقى قابلة للتعديل، لأنها تختلف قليلًا بين الشركات المصنّعة.
كيف يعمل حساب الزرع
الخلايا لكل بئر = الكثافة × المساحة · المعلّق = الخلايا لكل بئر × عدد الآبار ÷ التركيز · الوسط = الحجم لكل بئر × عدد الآبار − المعلّق
مثال محلول: زرع صفيحة 96 بئرًا بكثافة 20,000 خلية/cm² من معلّق تركيزه 1 × 10⁶ خلية/mL، بحجم 100 µL لكل بئر، مع زيادة 10 %. مساحة كل بئر 0.32 cm²، أي 6,400 خلية لكل بئر. 96 بئرًا × 1.1 = ما يعادل 105.6 بئرًا: 675,840 خلية، أي 0.676 mL من المعلّق. الحجم الكلي 10.56 mL، لذا أضف 9.88 mL من الوسط، واخلط، وضع 100 µL في كل بئر.
إذا كان حجم المعلّق وحده أكبر من الحجم النهائي، فالمخزون مخفّف أكثر من اللازم لتلك الكثافة: رسّب الخلايا بالطرد المركزي، وأعد تعليقها في وسط أقل، ثم عدّها مرة أخرى.
مساحات النمو والأحجام المعتادة
| الوعاء | مساحة النمو | الوسط | الزرع المعتاد (HeLa) |
|---|---|---|---|
| صفيحة 6 آبار | 9.6 cm² | 1–3 mL | 0.3 × 10⁶ لكل بئر |
| صفيحة 12 بئرًا | 3.5 cm² | 1–2 mL | 0.1 × 10⁶ لكل بئر |
| صفيحة 24 بئرًا | 1.9 cm² | 0.5–1 mL | 0.05 × 10⁶ لكل بئر |
| صفيحة 48 بئرًا | 1.1 cm² | 0.2–0.4 mL | 0.03 × 10⁶ لكل بئر |
| صفيحة 96 بئرًا | 0.32 cm² | 0.1–0.2 mL | 0.01 × 10⁶ لكل بئر |
| صفيحة 384 بئرًا | 0.084 cm² | ~0.08 mL | 0.0018 × 10⁶ لكل بئر |
| طبق 35 / 60 / 100 mm | 8.8 / 21.5 / 56.7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| قارورة T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
القيم مأخوذة من الجدول المرجعي لزراعة الخلايا من Thermo Fisher (أوعية Nunc). تختلف العلامات التجارية الأخرى قليلًا، فمثلًا مساحة بئر صفيحة Corning ذات 6 آبار 9.5 cm²؛ وحقل المساحة أعلاه قابل للتعديل. تعتمد الكثافة المناسبة على خط الخلايا وعلى الموعد الذي تريد أن تبلغ فيه المزرعة الالتقاء (confluence)، لذا اعتبر أرقام HeLa نقطة انطلاق.
الزرع بالتساوي
- عُدّ الخلايا باستخدام الهيموسيتومتر أو عدّاد آلي قبيل الزرع مباشرةً، واستخدم تركيز الخلايا الحية.
- أبقِ الخليط معلّقًا: اقلبه أو اسحبه بالماصة بين الصفوف، لأن الخلايا تترسب خلال دقائق.
- اترك الصفيحة المزروعة حديثًا مستوية في درجة حرارة الغرفة لمدة 15–30 دقيقة قبل وضعها في الحاضنة، للحد من تكدّس الخلايا عند الحواف.
- للتصوير، صوّر عدة حقول في كل بئر وتحقق من الكثافة على الصور: مع صورة معايَرة، يُستخرج عدد الخلايا لكل mm² مباشرةً من العدّ.
أسئلة
كيف أحسب عدد الخلايا لكل بئر؟
اضرب كثافة الزرع بالخلايا لكل cm² في مساحة نمو بئر واحد. مساحة بئر صفيحة 96 بئرًا نحو 0.32 cm²، لذا فإن 20,000 خلية/cm² تعني 6,400 خلية لكل بئر.
كم أحتاج من المعلّق الخلوي؟
إجمالي الخلايا اللازمة ÷ تركيز الخلايا. لـ 96 بئرًا بها 6,400 خلية (مع زيادة 10 %) من تركيز 1 × 10⁶ خلية/mL، يكون ذلك 675,840 ÷ 1,000,000 ≈ 0.68 mL، يُكمَّل بالوسط حتى الحجم النهائي.
هل هذا هو نفسه C1V1 = C2V2؟
نعم. تحل الحاسبة المعادلة C1 × V1 = C2 × V2 للخلايا: C1 هو تركيز المخزون لديك، وC2 تركيز خليط الزرع (الخلايا لكل بئر ÷ الحجم لكل بئر)، وV2 الحجم الكلي، وV1 المعلّق المطلوب سحبه.
ما مساحة سطح بئر في صفيحة 96 بئرًا؟
نحو 0.32 cm² للبئر القياسي مسطّح القاع (تذكر كلٌّ من Thermo Fisher وCorning القيمة 0.32 cm²)؛ أما صفائح 96 بئرًا نصف المساحة فنحو 0.16 cm².
هل هذه الحاسبة مجانية؟
نعم. تعمل في متصفحك ولا ترسل أي شيء إلى أي مكان. أما SlideScope، تطبيق المجهر المكتبي من الفريق نفسه، فهو تطبيق مدفوع مع مكتبة عينات مجانية (بكل الأدوات) واشتراك لصورك الخاصة.
المصادر
النتائج نظرية أو حسابية؛ قارنها بوثائق جهازك قبل الاعتماد عليها في العمل السريري أو الخاضع للتنظيم.
قِس على صورك الحقيقية
يفتح SlideScope 34 صيغة من صيغ المجاهر وماسحات الشرائح، منها CZI وND2 وSVS وLIF، مع المعايرة المسجلة في كل منها، فتظهر الأطوال والمساحات وأعداد الخلايا وأشرطة المقياس بوحدة µm دون أي إعداد. جرّب كل الأدوات مجانًا على العينات المدمجة؛ أما فتح صورك الخاصة فيتطلب اشتراكًا. هل حسمت قرارك؟ اشترك الآن.