תרבית תאים
מחשבון זריעת תאים
בחרו את הצלחת או את הבקבוק, הזינו את ריכוז התאים ואת צפיפות הזריעה, וקבלו את מספר התאים לבאר, כמה תרחיף תאים וכמה מצע לערבב, ומה נכנס לכל באר. שטחי הגידול ממולאים מראש עבור כלים נפוצים ונשארים ניתנים לעריכה, כי הם שונים מעט בין יצרנים.
איך עובד חישוב הזריעה
תאים לבאר = צפיפות × שטח · תרחיף = תאים לבאר × בארות ÷ ריכוז · מצע = נפח לבאר × בארות − תרחיף
דוגמה פתורה: זריעת צלחת 96 בארות בצפיפות של 20,000 תאים/cm² מתרחיף של 1 × 10⁶ תאים/mL, 100 µL לבאר, עם 10 % עודף. שטח כל באר הוא 0.32 cm², כלומר 6,400 תאים לבאר. 96 בארות × 1.1 = כמות של 105.6 בארות: 675,840 תאים, שהם 0.676 mL של תרחיף. הנפח הכולל הוא 10.56 mL, לכן מוסיפים 9.88 mL של מצע, מערבבים ומכניסים 100 µL לכל באר.
אם התרחיף לבדו גדול מהנפח הסופי, התרחיף המקורי מהול מדי לצפיפות הזו: שקעו את התאים בצנטריפוגה, השהו אותם מחדש בפחות מצע וספרו שוב.
שטחי גידול ונפחים אופייניים
| כלי תרבית | שטח גידול | מצע | זריעה אופיינית (HeLa) |
|---|---|---|---|
| צלחת 6 בארות | 9.6 cm² | 1–3 mL | 0.3 × 10⁶ לבאר |
| צלחת 12 בארות | 3.5 cm² | 1–2 mL | 0.1 × 10⁶ לבאר |
| צלחת 24 בארות | 1.9 cm² | 0.5–1 mL | 0.05 × 10⁶ לבאר |
| צלחת 48 בארות | 1.1 cm² | 0.2–0.4 mL | 0.03 × 10⁶ לבאר |
| צלחת 96 בארות | 0.32 cm² | 0.1–0.2 mL | 0.01 × 10⁶ לבאר |
| צלחת 384 בארות | 0.084 cm² | ~0.08 mL | 0.0018 × 10⁶ לבאר |
| צלחת פטרי 35 / 60 / 100 mm | 8.8 / 21.5 / 56.7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| בקבוק T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
הערכים לקוחים מטבלת העזר לתרביות תאים של Thermo Fisher (כלי Nunc). מותגים אחרים שונים מעט, למשל באר בצלחת 6 בארות של Corning היא 9.5 cm²; שדה השטח שלמעלה ניתן לעריכה. הצפיפות הנכונה תלויה בשורת התאים ובמועד שבו אתם רוצים שהתרבית תגיע לקונפלואנטיות, לכן התייחסו למספרי HeLa כנקודת התחלה.
זריעה אחידה
- ספרו בהמוציטומטר או במונה אוטומטי ממש לפני הזריעה, והשתמשו בריכוז התאים החיים.
- שמרו על התערובת בתרחיף: הפכו אותה או ערבבו בפיפטה בין שורות, כי התאים שוקעים תוך דקות.
- השאירו צלחת שנזרעה זה עתה במצב שטוח בטמפרטורת החדר 15–30 דקות לפני האינקובטור, כדי להפחית צפיפות יתר בשוליים.
- לצורכי הדמיה, צלמו כמה שדות בכל באר ובדקו את הצפיפות בתמונות: בתמונה מכוילת, תאים ל-mm² מתקבלים ישירות מספירה.
שאלות
איך מחשבים תאים לבאר?
מכפילים את צפיפות הזריעה בתאים ל-cm² בשטח הגידול של באר אחת. באר בצלחת 96 בארות היא כ-0.32 cm², כך ש-20,000 תאים/cm² הם 6,400 תאים לבאר.
כמה תרחיף תאים אני צריך?
סך התאים הנדרשים ÷ ריכוז התאים. עבור 96 בארות של 6,400 תאים (ועוד 10 % עודף) מתרחיף של 1 × 10⁶ תאים/mL, זה 675,840 ÷ 1,000,000 ≈ 0.68 mL, שמשלימים במצע עד לנפח הסופי.
האם זה אותו דבר כמו C1V1 = C2V2?
כן. המחשבון פותר את C1 × V1 = C2 × V2 עבור תאים: C1 הוא ריכוז התרחיף המקורי שלכם, C2 הריכוז של תערובת הזריעה (תאים לבאר ÷ נפח לבאר), V2 הנפח הכולל, ו-V1 התרחיף שצריך לקחת.
מהו שטח הפנים של באר בצלחת 96 בארות?
כ-0.32 cm² לבאר סטנדרטית עם תחתית שטוחה (גם Thermo Fisher וגם Corning מציינות 0.32 cm²); בצלחות 96 בארות בחצי שטח הבאר היא כ-0.16 cm².
האם המחשבון הזה חינמי?
כן. הוא רץ בדפדפן שלכם ולא שולח דבר לשום מקום. SlideScope, אפליקציית המיקרוסקופיה למחשב של אותו צוות, היא אפליקציה בתשלום עם ספריית דוגמאות חינמית (כל הכלים) ומנוי לתמונות שלכם.
מקורות
התוצאות תיאורטיות או חשבוניות; בדקו אותן מול התיעוד של המכשיר שלכם לפני שתסתמכו עליהן בעבודה קלינית או מפוקחת.
מדדו על התמונות האמיתיות שלכם
SlideScope פותח 34 פורמטים של מיקרוסקופים וסורקי שקופיות, ביניהם CZI, ND2, SVS ו-LIF, עם הכיול שלהם, כך שאורכים, שטחים, ספירות תאים ופסי קנה מידה מתקבלים ב-µm בלי להגדיר דבר. נסו כל כלי בחינם על הדוגמאות המובנות; כדי לפתוח את התמונות שלכם נדרש מנוי. כבר החלטתם? הירשמו למנוי עכשיו.