Culture cellulaire
Calculateur d’ensemencement cellulaire
Choisissez la plaque ou le flacon, saisissez la concentration cellulaire et la densité d’ensemencement, et obtenez le nombre de cellules par puits, les volumes de suspension cellulaire et de milieu à mélanger, et ce qu’il faut déposer dans chaque puits. Les surfaces de culture sont préremplies pour les contenants courants et restent modifiables, car elles varient légèrement d’un fabricant à l’autre.
Comment fonctionne le calcul d’ensemencement
cellules par puits = densité × surface · suspension = cellules par puits × puits ÷ concentration · milieu = volume par puits × puits − suspension
Exemple détaillé : ensemencer une plaque 96 puits à 20 000 cellules/cm² à partir d’une suspension à 1 × 10⁶ cellules/mL, 100 µL par puits, avec 10 % de marge. Chaque puits mesure 0,32 cm², soit 6400 cellules par puits. 96 puits × 1,1 = l’équivalent de 105,6 puits : 675 840 cellules, soit 0,676 mL de suspension. Le volume total est de 10,56 mL : ajoutez donc 9,88 mL de milieu, mélangez, et déposez 100 µL dans chaque puits.
Si la suspension seule dépasse le volume final, le stock est trop dilué pour cette densité : centrifugez les cellules, remettez-les en suspension dans moins de milieu et comptez à nouveau.
Surfaces de culture et volumes habituels
| Contenant | Surface de culture | Milieu | Ensemencement habituel (HeLa) |
|---|---|---|---|
| Plaque 6 puits | 9,6 cm² | 1–3 mL | 0,3 × 10⁶ par puits |
| Plaque 12 puits | 3,5 cm² | 1–2 mL | 0,1 × 10⁶ par puits |
| Plaque 24 puits | 1,9 cm² | 0,5–1 mL | 0,05 × 10⁶ par puits |
| Plaque 48 puits | 1,1 cm² | 0,2–0,4 mL | 0,03 × 10⁶ par puits |
| Plaque 96 puits | 0,32 cm² | 0,1–0,2 mL | 0,01 × 10⁶ par puits |
| Plaque 384 puits | 0,084 cm² | ~0,08 mL | 0,0018 × 10⁶ par puits |
| Boîte de 35 / 60 / 100 mm | 8,8 / 21,5 / 56,7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| Flacon T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Valeurs issues du tableau de référence de culture cellulaire de Thermo Fisher (contenants Nunc). Les autres marques diffèrent légèrement : par exemple, un puits de plaque 6 puits Corning mesure 9,5 cm² ; le champ de surface ci-dessus est modifiable. La bonne densité dépend de la lignée cellulaire et du moment où vous voulez que la culture atteigne la confluence : considérez les valeurs HeLa comme un point de départ.
Ensemencer de façon homogène
- Comptez avec un hémocytomètre ou un compteur automatique juste avant l’ensemencement, et utilisez la concentration en cellules vivantes.
- Maintenez le mélange en suspension : retournez-le ou pipetez-le entre les rangées, car les cellules sédimentent en quelques minutes.
- Laissez une plaque fraîchement ensemencée à plat à température ambiante pendant 15–30 minutes avant de la placer dans l’incubateur, pour limiter l’accumulation en bordure.
- Pour l’imagerie, acquérez quelques champs par puits et vérifiez la densité sur les images : avec une image étalonnée, le nombre de cellules par mm² découle directement d’un comptage.
Questions
Comment calculer le nombre de cellules par puits ?
Multipliez la densité d’ensemencement en cellules par cm² par la surface de culture d’un puits. Un puits de plaque 96 puits mesure environ 0,32 cm² : 20 000 cellules/cm² correspondent donc à 6400 cellules par puits.
De quel volume de suspension cellulaire ai-je besoin ?
Nombre total de cellules nécessaires ÷ concentration cellulaire. Pour 96 puits de 6400 cellules (plus 10 % de marge) à partir de 1 × 10⁶ cellules/mL, cela donne 675 840 ÷ 1 000 000 ≈ 0,68 mL, complétés avec du milieu jusqu’au volume final.
Est-ce la même chose que C1V1 = C2V2 ?
Oui. Le calculateur résout C1 × V1 = C2 × V2 pour des cellules : C1 est la concentration de votre stock, C2 la concentration du mélange d’ensemencement (cellules par puits ÷ volume par puits), V2 le volume total, et V1 la suspension à prélever.
Quelle est la surface d’un puits de plaque 96 puits ?
Environ 0,32 cm² pour un puits standard à fond plat (Thermo Fisher et Corning indiquent tous deux 0,32 cm²) ; les plaques 96 puits à demi-surface font environ 0,16 cm².
Ce calculateur est-il gratuit ?
Oui. Il s’exécute dans votre navigateur et n’envoie rien nulle part. SlideScope, l’application de microscopie de bureau conçue par la même équipe, est une application payante avec une bibliothèque d’échantillons gratuite (tous les outils) et un abonnement pour vos propres images.
Sources
Les résultats sont théoriques ou arithmétiques ; vérifiez-les par rapport à la documentation de votre instrument avant de vous y fier pour un travail clinique ou réglementé.
Mesurez sur vos vraies images
SlideScope ouvre 34 formats de microscopes et de scanners de lames, dont CZI, ND2, SVS et LIF, avec leur propre étalonnage : longueurs, surfaces, comptages de cellules et barres d’échelle sont donnés en µm sans aucun réglage. Essayez gratuitement tous les outils sur les échantillons intégrés ; pour ouvrir vos propres images, il faut un abonnement. Déjà décidé ? Abonnez-vous maintenant.