Культура клеток
Калькулятор посева клеток
Выберите планшет или флакон, введите концентрацию клеток и плотность посева и получите число клеток на лунку, объёмы клеточной суспензии и среды для смешивания и количество смеси на каждую лунку. Площади роста для распространённых сосудов заполнены заранее и доступны для изменения, потому что у разных производителей они немного различаются.
Как работает расчёт посева
клеток на лунку = плотность × площадь · суспензия = клеток на лунку × лунки ÷ концентрация · среда = объём на лунку × лунки − суспензия
Пример расчёта: посев 96-луночного планшета при плотности 20 000 клеток/см² из суспензии 1 × 10⁶ клеток/мл, 100 мкл на лунку, с запасом 10 %. Площадь каждой лунки 0,32 см², значит, 6400 клеток на лунку. 96 лунок × 1,1 = 105,6 лунки: 675 840 клеток, то есть 0,676 мл суспензии. Общий объём — 10,56 мл, поэтому добавьте 9,88 мл среды, перемешайте и внесите по 100 мкл в каждую лунку.
Если одной только суспензии больше, чем конечный объём, исходная суспензия слишком разбавлена для такой плотности: осадите клетки центрифугированием, ресуспендируйте в меньшем объёме среды и подсчитайте снова.
Площади роста и типичные объёмы
| Сосуд | Площадь роста | Среда | Типичный посев (HeLa) |
|---|---|---|---|
| 6-луночный планшет | 9,6 см² | 1–3 мл | 0,3 × 10⁶ на лунку |
| 12-луночный планшет | 3,5 см² | 1–2 мл | 0,1 × 10⁶ на лунку |
| 24-луночный планшет | 1,9 см² | 0,5–1 мл | 0,05 × 10⁶ на лунку |
| 48-луночный планшет | 1,1 см² | 0,2–0,4 мл | 0,03 × 10⁶ на лунку |
| 96-луночный планшет | 0,32 см² | 0,1–0,2 мл | 0,01 × 10⁶ на лунку |
| 384-луночный планшет | 0,084 см² | ~0,08 мл | 0,0018 × 10⁶ на лунку |
| Чашка 35 / 60 / 100 мм | 8,8 / 21,5 / 56,7 см² | 2 / 5 / 12 мл | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| Флакон T-25 / T-75 / T-175 | 25 / 75 / 175 см² | 3–5 / 8–15 / 35–53 мл | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Значения из справочной таблицы Thermo Fisher для культуры клеток (сосуды Nunc). У других производителей они немного отличаются, например лунка 6-луночного планшета Corning — 9,5 см²; поле площади выше можно изменить. Правильная плотность зависит от клеточной линии и от того, когда культура должна достичь конфлюэнтности, поэтому считайте значения для HeLa отправной точкой.
Равномерный посев
- Подсчитайте клетки в гемоцитометре или автоматическим счётчиком непосредственно перед посевом и используйте концентрацию живых клеток.
- Поддерживайте клетки во взвеси: переворачивайте или перемешивайте смесь пипеткой между рядами, потому что клетки оседают за считанные минуты.
- Оставьте только что засеянный планшет на ровной поверхности при комнатной температуре на 15–30 минут, прежде чем ставить его в инкубатор, чтобы клетки меньше скапливались у краёв.
- Для визуализации снимите несколько полей в каждой лунке и проверьте плотность по изображениям: на калиброванном изображении число клеток на мм² получается прямо из подсчёта.
Вопросы
Как рассчитать число клеток на лунку?
Умножьте плотность посева в клетках на см² на площадь роста одной лунки. Лунка 96-луночного планшета — около 0,32 см², поэтому 20 000 клеток/см² дают 6400 клеток на лунку.
Сколько нужно клеточной суспензии?
Всего нужно клеток ÷ концентрация клеток. Для 96 лунок по 6400 клеток (плюс 10 % запаса) из суспензии 1 × 10⁶ клеток/мл это 675 840 ÷ 1 000 000 ≈ 0,68 мл, доведённые средой до конечного объёма.
Это то же самое, что C1V1 = C2V2?
Да. Калькулятор решает C1 × V1 = C2 × V2 для клеток: C1 — концентрация исходной суспензии, C2 — концентрация смеси для посева (клеток на лунку ÷ объём на лунку), V2 — общий объём, V1 — объём суспензии, который нужно взять.
Какова площадь поверхности лунки 96-луночного планшета?
Около 0,32 см² для стандартной лунки с плоским дном (и Thermo Fisher, и Corning указывают 0,32 см²); у 96-луночных планшетов с половинной площадью — около 0,16 см².
Этот калькулятор бесплатный?
Да. Он работает в вашем браузере и никуда ничего не отправляет. SlideScope — настольное приложение для микроскопии от той же команды — платное, с бесплатной библиотекой образцов (все инструменты) и подпиской для ваших собственных изображений.
Источники
Результаты носят теоретический или арифметический характер; прежде чем полагаться на них в клинической или регулируемой работе, сверьте их с документацией вашего прибора.
Измеряйте на своих реальных изображениях
SlideScope открывает 34 формата микроскопов и сканеров слайдов, в том числе CZI, ND2, SVS и LIF, с их собственной калибровкой, поэтому длины, площади, подсчёт клеток и масштабные линейки получаются в µm без какой-либо настройки. Попробуйте все инструменты бесплатно на встроенных образцах; чтобы открывать собственные изображения, нужна подписка. Уже решили? Оформите подписку.